| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-27页 |
| 1 轮状病毒蛋白研究 | 第14-21页 |
| 1.1 VP1蛋白 | 第15-16页 |
| 1.2 VP2蛋白 | 第16页 |
| 1.3 VP3蛋白 | 第16-17页 |
| 1.4 VP4蛋白 | 第17页 |
| 1.5 VP6蛋白 | 第17-18页 |
| 1.6 VP7蛋白 | 第18页 |
| 1.7 NSp1蛋白 | 第18-19页 |
| 1.8 NSp2蛋白 | 第19页 |
| 1.9 NSp3蛋白 | 第19-20页 |
| 1.10 NSp4蛋白 | 第20页 |
| 1.11 NSp5蛋白 | 第20-21页 |
| 1.12 NSp6蛋白 | 第21页 |
| 2 轮状病毒疫苗研究进展 | 第21-25页 |
| 2.1 轮状病毒减毒活疫苗 | 第22-23页 |
| 2.1.1 单价疫苗 | 第22页 |
| 2.1.2 多价疫苗 | 第22-23页 |
| 2.2 灭活疫苗 | 第23页 |
| 2.3 亚单位疫苗 | 第23-24页 |
| 2.4 DNA疫苗 | 第24页 |
| 2.5 转基因植物口服疫苗 | 第24-25页 |
| 3 运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌载体系统研究进展 | 第25-26页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第26-27页 |
| 第二章 大熊猫轮状病毒VP4和VP7基因的克隆 | 第27-40页 |
| 1 材料 | 第27-29页 |
| 1.1 病毒株、菌株和试剂 | 第27-28页 |
| 1.2 主要仪器 | 第28页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-38页 |
| 2.1 目的基因的扩增 | 第29-32页 |
| 2.1.1 引物设计和合成 | 第29-30页 |
| 2.1.2 大熊猫轮状病毒总RNA的提取 | 第30页 |
| 2.1.3 反转录聚合酶链反应扩增GPRV-VP4和GPRV-VP7 | 第30-32页 |
| 2.2 目的基因的克隆 | 第32-38页 |
| 2.2.1 目的片段的回收 | 第32-33页 |
| 2.2.2 目的基因克隆、鉴定 | 第33-38页 |
| 3 结果 | 第38-39页 |
| 3.1 RT-PCR扩增目的基因 | 第38页 |
| 3.2 重组质粒PCR和测序鉴定 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 轮状病毒VP4-VP7基因真核表达质粒的减毒鼠伤寒沙门氏菌构建与鉴定 | 第40-54页 |
| 1 材料与方法 | 第40-49页 |
| 1.1 材料 | 第40-41页 |
| 1.1.1 菌株与质粒 | 第40页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第40-41页 |
| 1.2 方法 | 第41-44页 |
| 1.2.1 真核表达载体的构建 | 第41-44页 |
| 1.3 目的基因的转录与表达检测 | 第44-47页 |
| 1.3.1 转化及鉴定 | 第44页 |
| 1.3.2 无内毒素质粒的提取 | 第44-45页 |
| 1.3.3 重组质粒转染IPEC-J2细胞 | 第45-46页 |
| 1.3.4 目的基因表达检测 | 第46-47页 |
| 1.3.5 目的基因转录检测 | 第47页 |
| 1.4 重组质粒PVAX1-VP4-VP7转化入减毒沙门氏菌S.L7207 | 第47-48页 |
| 1.4.1 S.L7207感受态细胞制备 | 第47页 |
| 1.4.2 重组工程菌S.L7207/pVAX1-VP4、pVAX1-VP7、pVAX1-VP4-VP7的构建 | 第47-48页 |
| 1.4.3 重组减毒沙门氏菌S.L7207/pVAX1-VP4-VP7的鉴定 | 第48页 |
| 1.5 重组菌株生长特性鉴定 | 第48-49页 |
| 2 结果 | 第49-53页 |
| 2.1 真核表达载体构建结果 | 第49-50页 |
| 2.2 检测基因转录与表达结果 | 第50-51页 |
| 2.3 重组表达质粒转化沙门氏菌的结果 | 第51-52页 |
| 2.4 重组菌株生长特性鉴定结果 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-54页 |
| 第四章 携带GPRV-VP4-VP7基因的DNA疫苗的减毒沙门氏菌的免疫学特征 | 第54-66页 |
| 1 材料和方法 | 第54-58页 |
| 1.1 材料 | 第54页 |
| 1.2 方法 | 第54-58页 |
| 1.2.1 重组沙门氏菌的体外稳定性试验 | 第54-55页 |
| 1.2.2 重组沙门氏菌对小鼠的安全性试验 | 第55页 |
| 1.2.3 目的基因在体内转录的检测 | 第55页 |
| 1.2.4 重组菌株免疫后在不同组织中的消长试验(体内定植试验) | 第55-56页 |
| 1.2.5 重组减毒沙门氏菌免疫小鼠试验 | 第56-57页 |
| 1.2.6 MTT法检测脾淋巴细胞增殖情况 | 第57页 |
| 1.2.7 细胞因子检测 | 第57-58页 |
| 2 结果 | 第58-64页 |
| 2.0 重组菌株安全性试验结果 | 第58页 |
| 2.1 小鼠体内目的基因转录检测 | 第58-59页 |
| 2.2 重组菌株免疫后在不同组织中的消长动态 | 第59页 |
| 2.3 重组菌株体外稳定性试验 | 第59-60页 |
| 2.4 免疫小鼠抗GPRV抗体水平检测结果 | 第60-62页 |
| 2.5 淋巴细胞增殖检测结果 | 第62-63页 |
| 2.6 血清细胞因子检测结果 | 第63-64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
