| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-16页 |
| 1. 动物痒螨免疫学研究进展 | 第10-15页 |
| 1.1 抗原 | 第10-12页 |
| 1.2 免疫应答 | 第12-13页 |
| 1.2.1 体液免疫 | 第12-13页 |
| 1.2.2 细胞免疫 | 第13页 |
| 1.3 宿主与痒螨在感染过程中的相互作用 | 第13-14页 |
| 1.4 痒螨疫苗的研发进展 | 第14-15页 |
| 2. 本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 第二章 兔痒螨肌动蛋白的克隆表达,免疫定位及其免疫保护效力评估 | 第16-42页 |
| 摘要 | 第16页 |
| 引言 | 第16-17页 |
| 1. 材料和方法 | 第17-29页 |
| 1.1 材料 | 第17-19页 |
| 1.1.1 兔痒螨和实验兔 | 第17页 |
| 1.1.2 载体、菌株和主要试剂 | 第17页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 1.1.4 常用溶液的配制 | 第18-19页 |
| 1.1.5 主要生物信息数据库和分子生物学软件 | 第19页 |
| 1.2 试验方法 | 第19-29页 |
| 1.2.1 兔痒螨肌动蛋白的克隆 | 第19-22页 |
| 1.2.1.1 兔痒螨的采集 | 第19页 |
| 1.2.1.2 兔痒螨总RNA的提取 | 第19-20页 |
| 1.2.1.3 引物设计 | 第20页 |
| 1.2.1.4 肌动蛋白基因的RT-PCR扩增 | 第20-21页 |
| 1.2.1.5 PCR产物的纯化回收 | 第21-22页 |
| 1.2.1.6 目的基因的连接转化 | 第22页 |
| 1.2.1.7 菌落PCR鉴定 | 第22页 |
| 1.2.1.8 目的基因测序和分析 | 第22页 |
| 1.2.2 兔痒螨肌动蛋白的表达载体构建 | 第22-24页 |
| 1.2.2.1 表达引物的设计 | 第22页 |
| 1.2.2.2 表达基因的亚克隆 | 第22-23页 |
| 1.2.2.3 重组T克隆质粒的构建 | 第23页 |
| 1.2.2.4 肌动蛋白质粒提取与酶切 | 第23页 |
| 1.2.2.5 pET32a(+)质粒的提取与酶切 | 第23-24页 |
| 1.2.2.6 酶切后的肌动蛋白质粒与酶切后的pET32a(+)质粒连接转化 | 第24页 |
| 1.2.2.7 重组表达质粒酶切鉴定 | 第24页 |
| 1.2.3 重组pET32a(+)-act的原核表达 | 第24-26页 |
| 1.2.3.1 重组蛋白的表达 | 第24页 |
| 1.2.3.2 SDS-PAGE分析 | 第24-25页 |
| 1.2.3.3 表达条件优化 | 第25页 |
| 1.2.3.4 表达重组蛋白的可溶性分析 | 第25-26页 |
| 1.2.4 重组蛋白纯化 | 第26页 |
| 1.2.5 重组蛋白的免疫印迹 | 第26-27页 |
| 1.2.5.1 一抗血清的制备 | 第26-27页 |
| 1.2.5.2 SDS-PAGE电泳 | 第27页 |
| 1.2.5.3 电转移 | 第27页 |
| 1.2.5.4 免疫反应 | 第27页 |
| 1.2.6 高免血清的制备 | 第27-28页 |
| 1.2.7 蛋白定位 | 第28页 |
| 1.2.8 免疫保护实验 | 第28-29页 |
| 2 结果 | 第29-39页 |
| 2.1 兔痒螨肌动蛋白基因的克隆 | 第29-35页 |
| 2.1.1 兔痒螨肌动蛋白基因的PCR扩增 | 第29-31页 |
| 2.1.2 序列比对分析 | 第31-32页 |
| 2.1.3 兔痒螨肌动蛋白生物信息学分析 | 第32-35页 |
| 2.2 痒螨肌动蛋白基因的原核表达 | 第35-36页 |
| 2.2.1 表达条件优化 | 第35页 |
| 2.2.2 重组蛋白可溶性分析 | 第35-36页 |
| 2.3 免疫印迹结果 | 第36-37页 |
| 2.4 蛋白定位 | 第37页 |
| 2.5 免疫保护实验结果 | 第37-39页 |
| 3 讨论 | 第39-42页 |
| 3.1 兔痒螨肌动蛋白基本特征分析 | 第39-40页 |
| 3.2 特异性IgG水平分析 | 第40页 |
| 3.3 总IgE水平分析 | 第40-41页 |
| 3.4 痒螨免疫机制探讨 | 第41-42页 |
| 第三章 兔痒螨肌钙蛋白C的克隆表达和诊断价值评估 | 第42-59页 |
| 摘要 | 第42页 |
| 引言 | 第42-43页 |
| 1 材料和方法 | 第43-50页 |
| 1.1 材料 | 第43-45页 |
| 1.1.1 兔痒螨和实验兔 | 第43页 |
| 1.1.2 载体、菌株和主要试剂 | 第43页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第43页 |
| 1.1.4 常用溶液的配制 | 第43-44页 |
| 1.1.5 主要生物信息数据库和分子生物学软件 | 第44-45页 |
| 1.2 试验方法 | 第45-50页 |
| 1.2.1 兔痒螨肌钙蛋白C的克隆 | 第45-46页 |
| 1.2.1.1 兔痒螨的采集 | 第45页 |
| 1.2.1.2 兔痒螨总RNA的提取 | 第45页 |
| 1.2.1.3 引物设计 | 第45页 |
| 1.2.1.4 肌钙蛋白C基因的RT-PCR扩增 | 第45-46页 |
| 1.2.1.5 PCR产物的纯化回收 | 第46页 |
| 1.2.1.6 目的基因的连接转化 | 第46页 |
| 1.2.1.7 菌落PCR鉴定 | 第46页 |
| 1.2.1.8 目的基因测序和分析 | 第46页 |
| 1.2.2 兔痒螨肌钙蛋白C的表达载体构建 | 第46-47页 |
| 1.2.2.1 表达引物的设计 | 第46页 |
| 1.2.2.2 表达基因的亚克隆 | 第46页 |
| 1.2.2.3 重组T克隆质粒的构建 | 第46页 |
| 1.2.2.4 肌钙蛋白C质粒提取与酶切 | 第46-47页 |
| 1.2.2.5 pET32a(+)质粒的提取与酶切 | 第47页 |
| 1.2.2.6 酶切后的肌钙蛋白C质粒与酶切后的pET32a(+)质粒连接转化 | 第47页 |
| 1.2.2.7 重组表达质粒酶切鉴定 | 第47页 |
| 1.2.3 重组pET32a(+)-tro的原核表达 | 第47页 |
| 1.2.3.1 重组蛋白的表达 | 第47页 |
| 1.2.3.2 SDS-PAGE分析 | 第47页 |
| 1.2.3.3 表达条件优化 | 第47页 |
| 1.2.3.4 表达重组蛋白的可溶性分析 | 第47页 |
| 1.2.4 重组蛋白纯化 | 第47-48页 |
| 1.2.5 重组蛋白的免疫印迹 | 第48-49页 |
| 1.2.5.1 一抗血清的制备 | 第48页 |
| 1.2.5.2 SDS-PAGE电泳 | 第48页 |
| 1.2.5.3 电转移 | 第48-49页 |
| 1.2.5.4 免疫反应 | 第49页 |
| 1.2.6 Dot-ELISA诊断 | 第49-50页 |
| 2 结果 | 第50-57页 |
| 2.1 兔痒螨肌钙蛋白C基因的克隆 | 第50-54页 |
| 2.1.1 兔痒螨肌钙蛋白C基因的PCR扩增 | 第50-51页 |
| 2.1.2 兔痒螨肌钙蛋白C生物信息学分析 | 第51-54页 |
| 2.2 痒螨肌钙蛋白基因的原核表达 | 第54页 |
| 2.2.1 表达条件优化 | 第54页 |
| 2.2.2 重组蛋白可溶性分析 | 第54页 |
| 2.3 免疫印迹结果 | 第54-55页 |
| 2.4 Dot-ELISA诊断 | 第55-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 3.0 肌钙蛋白C序列分析 | 第57页 |
| 3.1 肌钙蛋白C与已知变应原交叉反应性预测分析 | 第57页 |
| 3.2 肌钙蛋白C作为诊断抗原的潜力分析 | 第57页 |
| 3.3 Dot-ELISA交叉反应性分析 | 第57-58页 |
| 3.4 评估方法可靠性分析 | 第58-59页 |
| 第四章 结论与创新点 | 第59-60页 |
| 1. 结论 | 第59页 |
| 2. 创新点 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 研究生期间发表论文 | 第68-69页 |
