| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第1章 前言 | 第14-24页 |
| 1.1 研究背景 | 第14-21页 |
| 1.1.1 CTX-M型超广谱 β-内酰胺酶的种类及起源 | 第14-15页 |
| 1.1.2 bla_(CTX-Ms)的基因环境及传播机制 | 第15-18页 |
| 1.1.3 CTX-M型 β-内酰胺酶的流行状况 | 第18页 |
| 1.1.4 CTX-M型 β-内酰胺酶的分子特征 | 第18-19页 |
| 1.1.5 CTX-M型 β-内酰胺酶的底物特性 | 第19-20页 |
| 1.1.6 CTX-M型 β-内酰胺酶的结构功能特征 | 第20-21页 |
| 1.2 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 1.3 研究技术路线 | 第22-24页 |
| 第2章 CTX-M型杂合酶的生化特性研究 | 第24-63页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.2.1 材料 | 第24-28页 |
| 2.2.1.1 菌株与载体来源 | 第24-25页 |
| 2.2.1.2 抗菌药物 | 第25页 |
| 2.2.1.3 培养基 | 第25页 |
| 2.2.1.4 主要试剂 | 第25-27页 |
| 2.2.1.5 主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 2.2.2 方法 | 第28-38页 |
| 2.2.2.1 目的基因的扩增与纯化 | 第28-30页 |
| 2.2.2.2 重组质粒的构建及鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.2.3 PCR定点突变 | 第31-32页 |
| 2.2.2.4 融合蛋白的表达 | 第32-34页 |
| 2.2.2.5 重组菌的MIC值测定 | 第34-35页 |
| 2.2.2.6 目的蛋白的分离纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.2.7 酶动力学参数测定 | 第36-37页 |
| 2.2.2.8 圆二色分析 | 第37-38页 |
| 2.2.2.9 蛋白空间结构模拟分析 | 第38页 |
| 2.3 结果与分析 | 第38-56页 |
| 2.3.1 目的基因的扩增及纯化结果 | 第38页 |
| 2.3.2 重组质粒的构建及鉴定结果 | 第38-40页 |
| 2.3.3 PCR定点突变结果 | 第40页 |
| 2.3.4 融合蛋白表达的结果 | 第40-43页 |
| 2.3.4.1 融合蛋白的预表达 | 第40-41页 |
| 2.3.4.2 蛋白表达条件的优化结果 | 第41-43页 |
| 2.3.4.3 蛋白表达水平的测定结果 | 第43页 |
| 2.3.5 重组菌的MIC值测试结果 | 第43-45页 |
| 2.3.6 目的蛋白的分离纯化结果 | 第45-47页 |
| 2.3.6.1 亲和层析中咪唑浓度的确定 | 第45页 |
| 2.3.6.2 凝血酶作用时间的确定 | 第45-46页 |
| 2.3.6.3 凝胶过滤层析结果 | 第46-47页 |
| 2.3.7 酶动力学参数的测定结果 | 第47-51页 |
| 2.3.7.1 β-内酰胺酶的鉴定结果 | 第47页 |
| 2.3.7.2 摩尔消光系数的测定结果 | 第47-48页 |
| 2.3.7.3 动力学参数的测定结果 | 第48-50页 |
| 2.3.7.4 抑制常数Ki及IC50的测定结果 | 第50-51页 |
| 2.3.8 圆二色分析结果 | 第51-54页 |
| 2.3.9 蛋白空间结构的比较 | 第54-56页 |
| 2.4 讨论 | 第56-62页 |
| 2.4.1 六种CTX-M型 β-内酰胺酶耐药表型与其酶动力学特征相吻合 | 第56-58页 |
| 2.4.2 残基V77通过增强CTX-M-55 的结构稳定性而增强其催化活性 | 第58-60页 |
| 2.4.3 活性位点远端残基增强CTX-M型杂合酶的催化活性 | 第60-62页 |
| 2.5 小结 | 第62-63页 |
| 第3章 携带bla_(CTX-M-1/9/1)杂合基因的质粒及菌株特征的研究 | 第63-103页 |
| 3.1 引言 | 第63-64页 |
| 3.2 材料与方法 | 第64-83页 |
| 3.2.1 材料 | 第64-66页 |
| 3.2.1.1 菌株来源 | 第64页 |
| 3.2.1.2 抗菌药物 | 第64页 |
| 3.2.1.3 培养基 | 第64页 |
| 3.2.1.4 主要试剂 | 第64-65页 |
| 3.2.1.5 主要试剂的配制 | 第65-66页 |
| 3.2.1.6 主要仪器和设备 | 第66页 |
| 3.2.2 方法 | 第66-83页 |
| 3.2.2.1 大肠杆菌中CTX-M杂合基因及其基因环境的PCR鉴定 | 第66-67页 |
| 3.2.2.2 大肠杆菌多位点序列分型 | 第67-68页 |
| 3.2.2.3 接合、转化实验 | 第68-71页 |
| 3.2.2.4 接合子/转化子S1-PFGE及Southern杂交 | 第71-76页 |
| 3.2.2.5 接合子/转化子质粒复制子分型 | 第76-79页 |
| 3.2.2.6 相似质粒的检测 | 第79-82页 |
| 3.2.2.7 质粒全序列测序 | 第82-83页 |
| 3.3 结果与分析 | 第83-90页 |
| 3.3.1 CTX-M杂合基因及其基因环境的PCR筛选及测序结果 | 第83-84页 |
| 3.3.2 大肠杆菌MLST结果 | 第84-86页 |
| 3.3.3 接合、转化试验结果 | 第86-87页 |
| 3.3.3.1 接合预实验结果 | 第86-87页 |
| 3.3.3.2 接合、转化试验结果 | 第87页 |
| 3.3.4 接合子和转化子S1-PFGE及Southern杂交结果 | 第87-88页 |
| 3.3.5 质粒复制子分型结果 | 第88-89页 |
| 3.3.6 相似质粒的检测结果及酶切图谱分析 | 第89页 |
| 3.3.6.1 相似质粒的检测结果 | 第89页 |
| 3.3.6.2 相似质粒的酶切图谱分析 | 第89页 |
| 3.3.7 质粒全序列测序结果 | 第89-90页 |
| 3.4 讨论 | 第90-102页 |
| 3.4.1 IncI2型质粒pHNY2-1、pHNAH46-1 和pHNLDH19的特征分析 | 第90-98页 |
| 3.4.2 ISEcp1-bla_(CTX-M)从IncI2型质粒向IncI1型质粒pHNAH4-1 的转移 | 第98页 |
| 3.4.3 质粒pHNAH4-1 不同于另外一个IncI1（ST108）型质粒 | 第98-99页 |
| 3.4.4 相似质粒在不同地区和不同ST型E. coli中的传播 | 第99-102页 |
| 3.5 小结 | 第102-103页 |
| 第4章 全文结论 | 第103-106页 |
| 4.1 全文结论 | 第103-105页 |
| 4.2 本研究创新点 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-115页 |
| 附录A：发表文章及参加的相关学术会议 | 第115-117页 |
| 附录B：在校期间所获奖项 | 第117页 |
