| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 符号说明 | 第12-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-25页 |
| 1.1 引言 | 第14页 |
| 1.2 石斛简介 | 第14-15页 |
| 1.2.1 药用石斛概况 | 第14-15页 |
| 1.2.2 铁皮石斛简介 | 第15页 |
| 1.3 多糖的研究进展 | 第15-21页 |
| 1.3.1 多糖的提取 | 第15-16页 |
| 1.3.2 多糖的分离 | 第16-17页 |
| 1.3.3 多糖的药理作用 | 第17-21页 |
| 1.3.3.1 多糖的免疫调节作用 | 第17-18页 |
| 1.3.3.2 多糖的抗肿瘤作用 | 第18-19页 |
| 1.3.3.3 多糖的降血糖作用 | 第19页 |
| 1.3.3.4 多糖的降血脂作用 | 第19-20页 |
| 1.3.3.5 多糖抗氧化及抗衰老作用 | 第20页 |
| 1.3.3.6 多糖对干细胞的药理作用 | 第20-21页 |
| 1.3.3.7 多糖的其他药理作用 | 第21页 |
| 1.4 胚胎干细胞简介 | 第21-22页 |
| 1.5 胚胎细胞的应用 | 第22-23页 |
| 1.5.1 药物的筛选和研究 | 第22页 |
| 1.5.2 临床研究 | 第22-23页 |
| 1.6 本课题的研究目的和思路 | 第23-25页 |
| 第二章 铁皮石斛多糖的提取 | 第25-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.1.1 实验药材 | 第25页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-28页 |
| 2.2.1 铁皮石斛多糖的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 苯酚-硫酸比色法测定铁皮石斛多糖的含量 | 第26-27页 |
| 2.2.2.1 主要溶液的配制 | 第26页 |
| 2.2.2.2 铁皮石斛多糖含量的测定 | 第26-27页 |
| 2.2.3 考马斯亮蓝G-250法测定所提铁皮石斛多糖中蛋白质的含量 | 第27-28页 |
| 2.2.3.1 主要溶液的配制 | 第27页 |
| 2.2.3.2 蛋白质含量的测定 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-30页 |
| 2.3.1 铁皮石斛多糖的含量测定结果 | 第28-29页 |
| 2.3.1.1 葡萄糖标准曲线 | 第28-29页 |
| 2.3.1.2 铁皮石斛多糖的含量 | 第29页 |
| 2.3.2 铁皮石斛多糖中蛋白质的含量测定结果 | 第29-30页 |
| 2.3.2.1 蛋白质标准曲线 | 第29-30页 |
| 2.3.2.2 所提铁皮石斛多糖中蛋白质的含量 | 第30页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞增殖的影响 | 第32-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 3.1.1 实验药材 | 第32页 |
| 3.1.2 细胞系及实验动物 | 第32页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-44页 |
| 3.2.1 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的制备 | 第34-37页 |
| 3.2.1.1 小鼠超数排卵 | 第34页 |
| 3.2.1.2 小鼠原代胚胎成纤维细胞(MEF)的分离 | 第34-35页 |
| 3.2.1.3 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的传代培养 | 第35-36页 |
| 3.2.1.4 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的冻存 | 第36页 |
| 3.2.1.5 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的复苏 | 第36-37页 |
| 3.2.2 饲养层细胞(MEF)的制备 | 第37-38页 |
| 3.2.3 小鼠胚胎干细胞(mES)的培养 | 第38-39页 |
| 3.2.3.1 小鼠胚胎干细胞(mES)的复苏 | 第38页 |
| 3.2.3.2 小鼠胚胎干细胞(mES)的传代培养 | 第38-39页 |
| 3.2.4 铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞生长的影响 | 第39-44页 |
| 3.2.4.1 铁皮石斛(脱蛋白)多糖对小鼠胚胎干细胞克隆形成率的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.4.2. 铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞增殖的影响 | 第40-41页 |
| 3.2.4.2.1 MTT法检测 | 第40页 |
| 3.2.4.2.2 生长曲线法检测 | 第40-41页 |
| 3.2.4.3 铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞多潜能性的影响 | 第41-44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-50页 |
| 3.3.1 克隆形成率实验结果 | 第45页 |
| 3.3.2 铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞增殖的影响 | 第45-48页 |
| 3.3.2.1 MTT检测实验结果 | 第45-47页 |
| 3.3.2.2 生长曲线实验结果 | 第47-48页 |
| 3.3.3 铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞多潜能性的影响 | 第48-50页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第50-51页 |
| 第四章 铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞分化的影响 | 第51-62页 |
| 4.1 实验材料 | 第51页 |
| 4.1.1 实验药材 | 第51页 |
| 4.1.2 细胞系及实验动物 | 第51页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第51页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第51页 |
| 4.2 实验方法 | 第51-56页 |
| 4.2.1 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的制备 | 第51页 |
| 4.2.2 饲养层细胞(MEF)的制备 | 第51页 |
| 4.2.3 小鼠胚胎干细胞(mES)的培养 | 第51-52页 |
| 4.2.4 小鼠拟胚体(mEB)的培养 | 第52页 |
| 4.2.4.1 差速贴壁分离饲养层细胞和小鼠胚胎干细胞 | 第52页 |
| 4.2.4.2 悬滴法进行小鼠拟胚体的培养 | 第52页 |
| 4.2.5 铁皮石斛多糖对小鼠拟胚体分化的影响 | 第52-56页 |
| 4.2.5.1 拟胚体细胞总RNA的提取 | 第53-54页 |
| 4.2.5.2 RNA逆转录为cDNA | 第54-55页 |
| 4.2.5.3 定量PCR | 第55-56页 |
| 4.3 结果与分析 | 第56-60页 |
| 4.3.1 外胚层标志性基因Nestin和Fgf5的表达结果 | 第56-58页 |
| 4.3.2 中胚层标志性基因Flk1和SM22α表达的结果 | 第58-59页 |
| 4.3.3 原始内胚层标志性基因AFP和Sox17表达的结果 | 第59-60页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 铁皮石斛多糖抗癌及免疫活性研究 | 第62-73页 |
| 5.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 5.1.1 实验药材 | 第62页 |
| 5.1.2 细胞系及实验动物 | 第62页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第62页 |
| 5.1.4 实验仪器 | 第62-63页 |
| 5.2 实验方法 | 第63-67页 |
| 5.2.1 铁皮石斛多糖抗癌活性研究 | 第63-64页 |
| 5.2.1.1 铁皮石斛多糖对癌细胞HepG2、A549、F9、NCCIT生长形态的影响 | 第63-64页 |
| 5.2.1.2 铁皮石斛多糖对癌细胞HepG2、A549、F9、NCCIT增殖的抑制作用 | 第64页 |
| 5.2.2 铁皮石斛多糖免疫活性研究 | 第64-67页 |
| 5.2.2.1 铁皮石斛多糖对小鼠脾脏细胞增殖的影响 | 第64-66页 |
| 5.2.2.2 铁皮石斛多糖对小鼠腹腔巨噬细胞增殖的影响 | 第66-67页 |
| 5.3 结果与分析 | 第67-71页 |
| 5.3.1 铁皮石斛多糖抗癌活性研究 | 第67-70页 |
| 5.3.1.1 癌细胞HepG2、A549、NCCIT和F9生长形态分析 | 第67-68页 |
| 5.3.1.2 铁皮石斛多糖对癌细胞HepG2、A549、NCCIT和F9增殖的影响 | 第68-70页 |
| 5.3.2 铁皮石斛多糖免疫活性研究 | 第70-71页 |
| 5.3.2.1 铁皮石斛多糖对小鼠脾脏细胞增殖速率的影响 | 第70-71页 |
| 5.3.2.2 铁皮石斛多糖对小鼠腹腔巨噬细胞增殖速率的影响 | 第71页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第71-73页 |
| 结论与展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 附录 | 第82-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第86页 |
