| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-7页 |
| 缩略词与英汉对照 | 第8-13页 |
| 1 前言 | 第13-21页 |
| 1.1 香蕉与香蕉枯萎病 | 第13页 |
| 1.2 香蕉枯萎病的危害 | 第13-14页 |
| 1.3 香蕉枯萎病的防治 | 第14-15页 |
| 1.4 真菌麦角甾醇的生物合成途径及本研究中相关目的基因 | 第15-19页 |
| 1.4.1 本研究中相关目的基因的选择 | 第18-19页 |
| 1.5 基于高通量测序的香蕉小分子RNA分析 | 第19-20页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.2 菌株与载体 | 第21-22页 |
| 2.3 PCR扩增引物 | 第22-24页 |
| 2.4 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.5 主要试剂、药品 | 第24-25页 |
| 2.6 主要溶液及试剂配方 | 第25-26页 |
| 2.6.1 1000×木村B营养母液 | 第25页 |
| 2.6.2 细菌培养基 | 第25页 |
| 2.6.3 Foc TR4培养基及培养基组成成分 | 第25页 |
| 2.6.4 抗生素贮存液 | 第25-26页 |
| 2.6.5 RNA抽提所需试剂 | 第26页 |
| 2.7 生物信息学分析工具 | 第26页 |
| 2.8 载体的构建及转化 | 第26-29页 |
| 2.8.1 目的片段的扩增 | 第26-27页 |
| 2.8.2 目的片段的连接 | 第27页 |
| 2.8.3 大肠杆菌热激感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| 2.8.4 热激法转化大肠杆菌 | 第28页 |
| 2.8.5 质粒提取及阳性质粒鉴定 | 第28页 |
| 2.8.6 阳性克隆的序列测定与分析 | 第28页 |
| 2.8.7 相关载体的构建及转化 | 第28-29页 |
| 2.8.8 农杆菌感受态细胞的制备和冻融转化 | 第29页 |
| 2.8.9 农杆菌转化子稳定性鉴定 | 第29页 |
| 2.9 ds RNA的表达 | 第29-30页 |
| 2.10 总RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.10.1 Triol法大量提取大肠杆菌总RNA | 第30页 |
| 2.10.2 总RNA中基因组DNA的去除 | 第30-31页 |
| 2.11 相关阳性菌株中m RNA的相对表达量 | 第31-32页 |
| 2.11.1 反转录c DNA第一条链的合成 | 第31页 |
| 2.11.2 大肠杆菌中四个靶基因编码蛋白m RNA的相对表达量 | 第31-32页 |
| 2.12 在体外靶标蛋白编码基因的ds RNA对病原菌的抑菌试验 | 第32-33页 |
| 2.12.1 病原菌Foc TR4及Foc Race 1 的培养分生孢子的获得 | 第32页 |
| 2.12.2 抑菌试验处理方法 | 第32页 |
| 2.12.3 抑菌试验处理设计 | 第32页 |
| 2.12.4 观察方法 | 第32-33页 |
| 2.13 麦角甾醇及胆固醇代谢途径中相关基因的m RNA水平的表达分析 | 第33-34页 |
| 2.13.1 Foc TR4菌体的获得 | 第33页 |
| 2.13.2 Foc TR4 m RNA的提取及反转录成c DNA | 第33页 |
| 2.13.3 m RNA反转录成c DNA | 第33页 |
| 2.13.4 荧光定量PCR检测相关基因的表达。 | 第33-34页 |
| 2.14 转基因香蕉小分子RNA的测序分析 | 第34-37页 |
| 2.14.1 RNAi-Fo ERG6和RNAi-Fo ERG11转基因香蕉材料的检测 | 第34-35页 |
| 2.14.2 测序转基因香蕉小分子RNA材料的获得 | 第35页 |
| 2.14.3 小分子RNA的高通量测序 | 第35-37页 |
| 2.14.4 生物信息学分析测序结果 | 第37页 |
| 2.15 Foc TR4对转基因香蕉中靶基因si RNA吸收的效果检测 | 第37-38页 |
| 2.15.1 香蕉叶片汁液的提取 | 第37-38页 |
| 2.15.2 体外液体抑菌试验 | 第38页 |
| 2.15.3 拍照处理 | 第38页 |
| 2.16 数据处理与分析 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-62页 |
| 3.1 香蕉枯萎病菌中四个靶标蛋白编码基因的生物信息学分析 | 第39页 |
| 3.1.1 四个靶标蛋白编码干涉片段的选取 | 第39页 |
| 3.2 相关载体的构建 | 第39-43页 |
| 3.2.1 香蕉遗传转化表达载体的构建 | 第39-41页 |
| 3.2.2 组成型原核表达载体的构建 | 第41-43页 |
| 3.3 大肠杆菌HT115菌株中四个靶标蛋白编码基因的ds RNA水平检测 | 第43-44页 |
| 3.4 Foc TR4及Foc race1早期发育的抑菌试验 | 第44-48页 |
| 3.4.1 四个基因的ds RNA处理Foc TR4的结果展示 | 第44-46页 |
| 3.4.2 四个靶标蛋白编码基因的ds RNA处理Foc Race 1 | 第46-48页 |
| 3.5 麦角甾醇及胆固醇代谢途径中相关基因的m RNA水平的表达分析 | 第48-53页 |
| 3.6 转基因香蕉中小分子RNA测序 | 第53-58页 |
| 3.6.1 转基因转基因香蕉材料的检测 | 第53页 |
| 3.6.2 测序材料的获得及Foc TR4侵染根后的表型 | 第53-54页 |
| 3.6.3 小分子RNA测序分析 | 第54-58页 |
| 3.7 Foc TR4对转基因香蕉中靶基因si RNA吸收的效果检测 | 第58-62页 |
| 4 讨论 | 第62-66页 |
| 4.1 抑菌试验及麦角甾醇生物合成途径中相关基因分析 | 第62-64页 |
| 4.2 小分子RNA在植物生长发育中的重要性 | 第64页 |
| 4.3 宿主诱导的基因沉默 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
