鱼腥藻PCC 7120中几个固氮相关基因的功能验证
| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语及英汉对照表 | 第7-12页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 蓝藻概述 | 第12-14页 |
| 1.2 蓝藻培养基简介 | 第14页 |
| 1.3 鱼腥藻PCC 7120 概述 | 第14-17页 |
| 1.4 Fox Genes | 第17页 |
| 1.5 sRNA概述 | 第17-18页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-47页 |
| 2.1 材料 | 第20-28页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第20-26页 |
| 2.1.2 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.2.1 鱼腥藻PCC 7120 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.2.2 E.coli培养基 | 第27页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第27-28页 |
| 2.1.4 试剂 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-32页 |
| 2.2.1 鱼腥藻PCC 7120 培养条件 | 第28-29页 |
| 2.2.2 引物设计及合成 | 第29页 |
| 2.2.3 靶基因片段的测序 | 第29-31页 |
| 2.2.4 三亲结合转移 | 第31-32页 |
| 2.3 基因敲除 | 第32-42页 |
| 2.3.1 单交换质粒p ZR606 | 第32-34页 |
| 2.3.2 单交换重组原理 | 第34页 |
| 2.3.3 靶基因选择与敲除 | 第34-42页 |
| 2.3.3.1 靶基因选择 | 第34页 |
| 2.3.3.2 克隆质粒构建及保存 | 第34-37页 |
| 2.3.3.3 单交换质粒构建及保存 | 第37-39页 |
| 2.3.3.4 敲除菌株获得 | 第39-42页 |
| 2.3.3.5 敲除菌株平板培养 | 第42页 |
| 2.4 基因互补 | 第42-45页 |
| 2.4.1 表达质粒pZR670 | 第42-44页 |
| 2.4.2 互补质粒构建及保存 | 第44页 |
| 2.4.3 互补菌株获得及其培养 | 第44-45页 |
| 2.4.4 敲除互补研究的探索 | 第45页 |
| 2.5 sRNA干涉 | 第45-47页 |
| 2.5.1 sRNA测序 | 第45页 |
| 2.5.2 干涉原理简介 | 第45页 |
| 2.5.3 质粒构建 | 第45-46页 |
| 2.5.3.1 sRNA克隆质粒的构建 | 第45-46页 |
| 2.5.3.2 sRNA表达质粒的构建 | 第46页 |
| 2.5.4 干涉菌株的获得 | 第46-47页 |
| 2.5.5 干涉菌株的培养 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-62页 |
| 3.1 野生型鱼腥藻PCC 7120 细胞形态 | 第47-49页 |
| 3.2 敲除与互补 | 第49-60页 |
| 3.2.1 敲除菌株的鉴定及纯化 | 第49-51页 |
| 3.2.2 化合氮源对敲除株的影响 | 第51-52页 |
| 3.2.3 互补菌株的鉴定 | 第52-53页 |
| 3.2.4 互补菌株在有氮和无氮源的生长表型 | 第53-60页 |
| 3.3 sRNA干涉 | 第60-62页 |
| 3.3.1 质粒构建测序鉴定 | 第60页 |
| 3.3.2 干涉菌株鉴定 | 第60页 |
| 3.3.3 干涉菌株在有氮和无氮源的生长表型 | 第60-62页 |
| 4 讨论及展望 | 第62-66页 |
| 4.1 讨论 | 第62-64页 |
| 4.1.1 基因敲除 | 第62页 |
| 4.1.2 基因互补 | 第62-63页 |
| 4.1.3 sRNA干涉 | 第63-64页 |
| 4.2 展望 | 第64页 |
| 4.3 结论 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 附录A | 第73-80页 |
