| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-32页 |
| 1.1 动物转基因技术的发展和应用 | 第13-15页 |
| 1.1.1 转基因技术方法 | 第13-14页 |
| 1.1.2 动物转基因技术与动物抗病育种 | 第14-15页 |
| 1.2 Toll样受体 | 第15-19页 |
| 1.2.1 Toll样受体家族 | 第16页 |
| 1.2.2 TLRs信号通路 | 第16-18页 |
| 1.2.3 TLRs与细菌感染 | 第18-19页 |
| 1.3 布鲁氏菌病 | 第19-27页 |
| 1.3.1 布鲁氏菌病的流行学基本情况 | 第20-21页 |
| 1.3.2 布鲁氏菌病的主要临床症状 | 第21-23页 |
| 1.3.3 宿主自身影响布鲁氏菌病感染的因素 | 第23-24页 |
| 1.3.4 布鲁氏菌病的防控与面临的困难 | 第24-27页 |
| 1.4 布鲁氏菌的生物学特性 | 第27-31页 |
| 1.4.1 布鲁氏菌概述 | 第27-28页 |
| 1.4.2 布鲁氏菌的细胞生物学 | 第28-30页 |
| 1.4.3 布鲁氏菌毒力因子 | 第30-31页 |
| 1.4.4 TLR4和布鲁氏菌感染 | 第31页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 第二章 过表达oTLR4转基因绵羊的鉴定和筛选 | 第32-49页 |
| 2.1 实验动物和质粒 | 第32-36页 |
| 2.1.1 主要实验试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.2 细胞培养试剂耗材 | 第33页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第33-34页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第34-36页 |
| 2.1.5 主要分析软件 | 第36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-44页 |
| 2.2.1 过表达转基因oTLR4绵羊的鉴定 | 第36-41页 |
| 2.2.2 实验羊只外周血单核巨噬细胞TLR4 mRNA的定量检测 | 第41-44页 |
| 2.2.3 用于过表达oTLR4转基因羊人工感染布鲁氏菌攻毒实验羊只的筛选 | 第44页 |
| 2.3 实验结果 | 第44-48页 |
| 2.3.1 显微注射法生产遗传稳定的过表达oTLR4转基因绵羊 | 第44-45页 |
| 2.3.2 过表达oTLR4转基因绵羊的鉴定 | 第45-46页 |
| 2.3.3 过表达oTLR4转基因绵羊TLR4相对表达水平 | 第46-47页 |
| 2.3.4 用于人工感染布鲁氏菌16M的实验羊的选择 | 第47-48页 |
| 2.4 小结 | 第48-49页 |
| 第三章 过表达oTLR4转基因绵羊抗布鲁氏菌病能力的评估 | 第49-85页 |
| 3.1 实验材料 | 第49-52页 |
| 3.1.1 实验动物和攻毒菌株 | 第49页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第49-50页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第50-51页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第51页 |
| 3.1.5 主要分析软件 | 第51-52页 |
| 3.2 实验方法 | 第52-57页 |
| 3.2.1 布鲁氏菌16M菌种准备 | 第52-53页 |
| 3.2.2 实验羊只接种布鲁氏菌16M | 第53页 |
| 3.2.3 过表达oTLR4转基因绵羊人工感染布鲁氏菌16M急性感染期的临床表现 | 第53页 |
| 3.2.4 实验羊人工感染布鲁氏菌16M急性感染期血常规监测 | 第53-54页 |
| 3.2.5 过表达oTLR4转基因绵羊组织液样品和血液样品的细菌学检测 | 第54-55页 |
| 3.2.6 实验羊人工感染布鲁氏菌16M急性感染期血清学检测 | 第55页 |
| 3.2.7 实验羊人工感染布鲁氏菌16M急性感染期外周血细胞因子检测 | 第55页 |
| 3.2.8 实验绵羊的尸检和组织病理学检测 | 第55-57页 |
| 3.3 实验结果 | 第57-83页 |
| 3.3.1 过表达oTLR4转基因绵羊人工感染布鲁氏菌16M急性感染期的临床表现 | 第57-62页 |
| 3.3.2 实验羊人工感染布鲁氏菌16M急性感染期血常规监测 | 第62-69页 |
| 3.3.3 过表达oTLR4转基因绵羊组织液样品和血液样品的细菌学检测 | 第69页 |
| 3.3.4 过表达oTLR4转基因绵羊急性感染期血清学检测 | 第69-70页 |
| 3.3.5 实验羊人工感染布鲁氏菌16M急性感染期外周血细胞因子检测 | 第70-73页 |
| 3.3.6 实验绵羊的尸检和组织病理学检测 | 第73-81页 |
| 3.3.7 实验绵羊的组织载菌量检测 | 第81-83页 |
| 3.4 讨论 | 第83-85页 |
| 第四章 过表达TLR4影响单核巨噬细胞吞噬和清除布鲁氏菌机制研究 | 第85-96页 |
| 4.1 试验材料 | 第85-88页 |
| 4.1.1 试验动物、质粒和菌株 | 第85页 |
| 4.1.2 主要买验试剂 | 第85-86页 |
| 4.1.3 细胞培养试剂与耗材 | 第86页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第86-87页 |
| 4.1.5 主要溶液配制 | 第87页 |
| 4.1.6 主要分析软件 | 第87-88页 |
| 4.2 实验方法 | 第88-91页 |
| 4.2.1 绵羊单核巨噬细胞的分离和培养 | 第88-89页 |
| 4.2.2 过表达oTLR4转基因绵羊单核巨噬细胞吞噬和杀伤能力的测定 | 第89页 |
| 4.2.3 过表达oTLR4转基因绵羊单核巨噬细胞吞噬和杀伤布鲁氏菌过程中细胞因子的测定 | 第89-91页 |
| 4.2.4 过表达oTLR4对布鲁氏菌抑制巨噬细胞凋亡影响的检测 | 第91页 |
| 4.3 实验结果 | 第91-94页 |
| 4.3.1 过表达oTLR4转基因绵羊单核巨噬细胞吞噬和杀伤能力的测定 | 第91-92页 |
| 4.3.2 过表达oTLR4转基因绵羊单核巨噬细胞吞噬布鲁氏菌后炎症因子的变化 | 第92-93页 |
| 4.3.3 未检测到过表达oTLR4影响感染的单核巨噬细胞的凋亡 | 第93-94页 |
| 4.4 讨论 | 第94-96页 |
| 第五章 结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-107页 |
| 致谢 | 第107-109页 |
| 个人简历 | 第109页 |
