| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-31页 |
| 1 前言 | 第15-16页 |
| 2. mTOR信号调控蛋白质沉积 | 第16-19页 |
| 2.1 mTORC1 定义及组成 | 第16-17页 |
| 2.2 mTORC1 和蛋白质合成 | 第17-18页 |
| 2.3 mTORC1 与自噬和蛋白质降解 | 第18-19页 |
| 3 氨基酸对mTOR信号的调节 | 第19-22页 |
| 3.1 调节mTOR信号的氨基酸 | 第19-20页 |
| 3.2 氨基酸调节mTOR信号的机制 | 第20-21页 |
| 3.3 不同种类氨基酸调节mTOR信号的区别 | 第21-22页 |
| 4 mTOR信号调节中的氨基酸转运感应机制 | 第22-24页 |
| 4.1 参与mTOR信号调节的氨基酸转运体 | 第22-23页 |
| 4.2 参与mTOR信号调节的氨基酸转运感受体 | 第23-24页 |
| 4.3 参与mTOR信号调节的氨基酸受体 | 第24页 |
| 5 氨基酸受体T1R1/T1R3 在mTOR信号调节中的作用及机制 | 第24-29页 |
| 5.1 T1R1/T1R3 定义及作用方式 | 第24-26页 |
| 5.2 T1R1/T1R3 对氨基酸的感应情况 | 第26页 |
| 5.3 T1R1/T1R3 感应氨基酸的种属特异性 | 第26页 |
| 5.4 T1R1/T1R3 发挥不同功能时的氨基酸特异性 | 第26-28页 |
| 5.5 T1R1/T1R3 介导氨基酸调控mTOR信号的分子机制 | 第28-29页 |
| 5.6 T1R1/T1R3 介导氨基酸调控mTOR信号的特异性 | 第29页 |
| 6 问题的提出及研究的目的与意义 | 第29-31页 |
| 第二章 参与T1R1/T1R3 介导的调控mTOR信号的胞外氨基酸筛选 | 第31-47页 |
| 1 前言 | 第31-32页 |
| 2 实验材料和方法 | 第32-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第32页 |
| 2.2 主要仪器、试剂和溶液的配制 | 第32-35页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第32页 |
| 2.2.2 主要试剂和试剂盒 | 第32-33页 |
| 2.2.3 主要溶液的配制 | 第33-35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-38页 |
| 2.3.1 C2C12 细胞培养及诱导分化 | 第35页 |
| 2.3.2 细胞药物处理 | 第35页 |
| 2.3.3 总RNA提取及反转录 | 第35-36页 |
| 2.3.4 Q-PCR | 第36页 |
| 2.3.5 细胞总蛋白抽提及Western blot检测 | 第36-37页 |
| 2.3.6 SUnSET非放射性方法测蛋白质合成速率 | 第37页 |
| 2.3.7 Fluo-8 检测胞内Ca2+变化 | 第37页 |
| 2.3.8 统计分析 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-45页 |
| 3.1 Q-PCR鉴定C2C12 成肌细胞中T1R1/T1R3 的表达情况 | 第38-39页 |
| 3.2 C2C12 细胞中T1R1/T1R3 感应氨基酸的功能验证 | 第39-41页 |
| 3.2.1 [Ca2+] i抑制剂BAPTA-AM处理对mTORC1 的影响 | 第39页 |
| 3.2.2 ERK1/2 抑制剂U0126 处理对mTORC1 的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.3 T1R1/T1R3 感应氨基酸增强剂处理对mTORC1 的影响 | 第40-41页 |
| 3.3 影响T1R1/T1R3、mTOR信号的氨基酸筛选 | 第41-45页 |
| 3.3.1 Western blot验证能影响细胞内Ca2+浓度的氨基酸mTORC1 的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.2 SUnSET非放射性方法检测蛋氨酸对蛋白质合成的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.3 Rapamycin处理对蛋氨酸诱导的蛋白质合成的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.4 Q-PCR检测蛋氨酸对蛋白质降解相关基因Atrogin1 及MuRF1 水平的影响 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 4.1 T1R1/T1R3 在C2C12 细胞中的表达及功能验证 | 第45-46页 |
| 4.2 影响 T1R1/T1R3、m TOR 信号的氨基酸筛选 | 第46-47页 |
| 第三章 C2C12 成肌细胞内氨基酸调控mTORC1 的机制及特异性研究 | 第47-63页 |
| 1 前言 | 第47-48页 |
| 2 实验材料和方法 | 第48页 |
| 2.1 实验材料 | 第48页 |
| 2.2 试验方法 | 第48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-59页 |
| 3.1 蛋氨酸调控 m TORC1 的机制 | 第48-53页 |
| 3.1.1 IMP处理对蛋氨酸引起的蛋白质合成相关蛋白水平的影响 | 第48-49页 |
| 3.1.2 U73122 处理对蛋氨酸引起的蛋白质合成的影响 | 第49-50页 |
| 3.1.3 蛋氨酸对细胞内 Ca~(2+)的影响 | 第50页 |
| 3.1.4 BAPTA-AM处理对蛋氨酸诱导的蛋白质合成的影响 | 第50-52页 |
| 3.1.5 U0126 处理对蛋氨酸诱导的蛋白质合成的影响 | 第52-53页 |
| 3.2 ERK1/2 在T1R1/T1R3 介导蛋氨酸调控mTOR中的作用 | 第53-55页 |
| 3.3 T1R1/T1R3 介导调控mTOR信号的氨基酸特异性研究 | 第55-59页 |
| 3.3.1 不同氨基酸处理对p-ERK、p-mTOR蛋白水平的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.2 BAPTA-AM、U0126 处理对亮氨酸诱导的蛋白质合成的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.3 蛋氨酸、亮氨酸处理对蛋白质合成相关蛋白水平的影响比较 | 第57-58页 |
| 3.3.4 蛋氨酸调控mTOR的种属特异性 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-63页 |
| 4.1 蛋氨酸能通过T1R1/T1R3-PLC-Ca~(2+)-ERK1/2 信号转导途径激活mTORC1。 | 第59-60页 |
| 4.2 ERK1/2 在 T1R1/T1R3 介导蛋氨酸调控 m TOR 中的作用。 | 第60页 |
| 4.3 T1R1/T1R3 介导氨基酸调控mTOR信号具有氨基酸特异性。 | 第60-61页 |
| 4.4 小结 | 第61-63页 |
| 结语 | 第63-64页 |
| 1 研究结论 | 第63页 |
| 2 创新点 | 第63页 |
| 3 本研究不足之处 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
