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家蚕BmVps4和BmVta1功能的初步研究

摘要第5-7页
ABSTRACT第7-9页
第一章 绪论第13-32页
    1.1 ESCRT研究进展第13-24页
        1.1.1 ESCRT复合物第13-15页
        1.1.2 Vps4第15-18页
        1.1.3 ESCRT在多种生命过程中发挥重要作用第18-22页
        1.1.4 ESCRT与人类健康的关系第22-24页
    1.2 家蚕生长发育过程及调控机制第24-26页
        1.2.1 家蚕的生活史第25页
        1.2.2 家蚕生长发育的调控机制第25-26页
    1.3 RNA干扰及其应用进展第26-30页
    1.4 本研究的目的及意义第30页
    1.5 主要研究内容和技术路线第30-32页
第二章 Bm Vps4和Bm Vta1的生物信息学分析第32-43页
    2.1 生物信息学分析第32-33页
        2.1.1 数据来源第32页
        2.1.2 生物信息学分析第32-33页
    2.2 结果与分析第33-41页
        2.2.1 基因序列分析第33-35页
        2.2.2 基因结构分析第35-36页
        2.2.3 信号肽、亚细胞定位预测第36页
        2.2.4 结构域分析及三维结构建模第36页
        2.2.5 染色体定位第36-37页
        2.2.6 蛋白质序列比对及系统进化分析第37-41页
    2.3 讨论与小结第41-43页
第三章 Bm Vps4和Bm Vta1基因克隆、蛋白表达及多克隆抗体制备第43-62页
    3.1 材料与试剂第43-47页
        3.1.1 实验材料第43页
        3.1.2 实验试剂第43-44页
        3.1.3 实验试剂的配制第44-46页
        3.1.4 仪器第46-47页
    3.2 实验方法与步骤第47-53页
        3.2.1 总RNA的提取第47-48页
        3.2.2 RNA反转录成c DNA第48-49页
        3.2.3 PCR扩增Bm Vps4、Bm Vta1基因第49-50页
        3.2.4 重组表达载体的构建第50-51页
        3.2.5 重组蛋白Bm Vps4、Bm Vta1在大肠杆菌中表达第51页
        3.2.6 Western Blot分析第51-52页
        3.2.7 质谱鉴定第52页
        3.2.8 多克隆抗血清的制备第52-53页
    3.3 结果与分析第53-60页
        3.3.1 Bm Vps4和Bm Vta1基因克隆第53-54页
        3.3.2 重组蛋白的原核表达第54-57页
        3.3.3 重组蛋白的质谱鉴定第57-59页
        3.3.4 多克隆抗体制备第59-60页
    3.4 讨论与小结第60-62页
第四章 Bm Vps4和Bm Vta1蛋白的亚细胞定位第62-70页
    4.1 材料与试剂第62页
        4.1.1 实验材料第62页
        4.1.2 实验试剂第62页
    4.2 实验方法第62-66页
        4.2.1 引物设计第62-64页
        4.2.2 瞬时表达质粒PIB-Bm Vps4-egfp、PIB-Bm Vta1-egfp的构建第64-65页
        4.2.3 转染家蚕Bm N细胞第65页
        4.2.4 Bm Vps4和Bm Vta1蛋白的亚细胞定位第65-66页
    4.3 结果与分析第66-68页
        4.3.1 瞬时表达质粒p IB-Bm Vps4-egfp和p IB-Bm Vta1-egfp的构建第66-67页
        4.3.2 Bm Vps4和Bm Vta1蛋白的亚细胞定位第67-68页
    4.4 讨论与小结第68-70页
第五章 Bm Vps4和Bm Vta1在家蚕不同发育时期和不同组织器官中的基因转录和蛋白表达分析第70-79页
    5.1 材料与试剂第70-71页
        5.1.1 实验材料第70页
        5.1.2 实验试剂第70-71页
        5.1.3 实验仪器第71页
    5.2 实验方法第71-73页
        5.2.1 Bm Vps4和Bm Vta1基因在家蚕不同发育时期的转录分析第71-72页
        5.2.2 Bm Vps4和Bm Vta1基因在家蚕五龄幼虫不同组织器官的转录分析第72页
        5.2.3 Bm Vps4和Bm Vta1蛋白在家蚕不同发育时期的表达分析第72-73页
        5.2.4 Bm Vps4和Bm Vta1蛋白在家蚕五龄幼虫不同组织器官的表达分析第73页
    5.3 结果与分析第73-77页
        5.3.1 Bm Vps4和Bm Vta1基因在家蚕不同发育时期的转录分析第73-74页
        5.3.2 Bm Vps4和Bm Vta1基因在家蚕五龄幼虫不同组织器官的转录分析第74-76页
        5.3.3 Bm Vps4、Bm Vta1蛋白在家蚕蚕卵及幼虫不同发育时期的表达分析第76-77页
        5.3.4 Bm Vps4、Bm Vta1蛋白在家蚕五龄幼虫不同组织器官的表达分析第77页
    5.4 讨论与小结第77-79页
第六章 RNA干扰Bm Vps4对家蚕变态发育的影响第79-92页
    6.1 材料与试剂第79页
        6.1.1 实验材料第79页
        6.1.2 实验试剂第79页
        6.1.3 实验仪器第79页
    6.2 实验方法第79-81页
        6.2.1 Bm Vps4小RNA干扰片段的设计第79-80页
        6.2.2 将小RNA干扰片段注射进入家蚕体内第80页
        6.2.3 家蚕变态发育相关数据统计与分析第80-81页
        6.2.4 总RNA的提取以及荧光定量PCR第81页
    6.3 结果与分析第81-88页
        6.3.1 注射法对家蚕存活率的影响第81-82页
        6.3.2 荧光定量PCR检测RNA干扰效果第82页
        6.3.3 RNA干扰对家蚕变态发育的影响第82-88页
    6.4 讨论与小结第88-92页
第七章 家蚕核型多角体病毒Bm NPV感染家蚕Bm N细胞对Bm Vps4和Bm Vta1基因转录水平的影响第92-98页
    7.1 材料与试剂第93-94页
        7.1.1 实验材料第93页
        7.1.2 实验试剂第93-94页
    7.2 实验方法第94-95页
        7.2.1 细胞复苏第94页
        7.2.2 细胞培养第94页
        7.2.3 病毒感染细胞第94-95页
        7.2.4 RNA提取、反转录与荧光定量PCR第95页
    7.3 结果与分析第95-96页
    7.4 讨论与小结第96-98页
第八章 总结与展望第98-101页
    8.1 总结第98-99页
    8.2 展望第99-101页
参考文献第101-109页
致谢第109-111页
在校期间发表论文第111页
参加课题第111-112页
附录第112页

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