| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 第一篇 文献综述及研究进展 | 第12-21页 |
| 第一章 灰树花综述 | 第12-21页 |
| 1.1 灰树花的分类及形态学概述 | 第12页 |
| 1.2 灰树花的化学成分 | 第12-13页 |
| 1.3 灰树花的药用价值 | 第13-14页 |
| 1.3.1 抗肿瘤 | 第13页 |
| 1.3.2 降血糖 | 第13页 |
| 1.3.3 降血压 | 第13页 |
| 1.3.4 降血脂 | 第13-14页 |
| 1.3.5 增强免疫力 | 第14页 |
| 1.3.6 抗艾滋病 | 第14页 |
| 1.4 法尼基焦磷酸合酶概述 | 第14-20页 |
| 1.4.1 类异戊二烯的生物合成途径 | 第14-16页 |
| 1.4.2 法尼基焦磷酸合成酶 | 第16-20页 |
| 1.5 选题依据 | 第20-21页 |
| 第二篇 研究内容 | 第21-59页 |
| 第一章 灰树花菌株的培养与鉴定 | 第21-26页 |
| 1.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 1.1.1 菌株 | 第21页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第21页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第21-22页 |
| 1.2 实验方法 | 第22-24页 |
| 1.2.1 灰树花菌种的活化与复壮 | 第22页 |
| 1.2.2 灰树花菌丝体的液体培养 | 第22页 |
| 1.2.3 灰树花的总DNA提取 | 第22页 |
| 1.2.4 ITS鉴别 | 第22-23页 |
| 1.2.5 PCR产物回收及克隆 | 第23-24页 |
| 1.3 结果与分析 | 第24-25页 |
| 1.3.1 菌株JAU H21的形态学鉴定 | 第24-25页 |
| 1.3.2 菌株JAU H21的分子学鉴定 | 第25页 |
| 1.4 讨论 | 第25-26页 |
| 第二章 灰树花法尼基焦磷酸合酶基因的特异片段及两端序列的获取 | 第26-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第26页 |
| 2.1.1 菌株 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-31页 |
| 2.2.1 总DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第27页 |
| 2.2.3 第一条cDNA的反转录反应 | 第27页 |
| 2.2.4 简并引物的设计 | 第27-28页 |
| 2.2.5 灰树花法尼基焦磷酸合酶基因的特异片段 | 第28-29页 |
| 2.2.6 灰树花法尼基焦磷酸合酶的 5’端序列克隆 | 第29-30页 |
| 2.2.7 灰树花法尼基焦磷酸合酶 3’端序列拓增 | 第30-31页 |
| 2.3 结果分析 | 第31-34页 |
| 2.3.1 RNA条带及浓度的检测 | 第31-32页 |
| 2.3.2 法尼基焦磷酸合酶的特异片段 | 第32页 |
| 2.3.3 灰树花法尼基焦磷酸合酶的 5’端序列 | 第32-33页 |
| 2.3.4 灰树花的法尼基焦磷酸合酶的 3’端序列 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 法尼基焦磷酸合酶的基因cDNA全长及序列分析 | 第35-40页 |
| 3.1 实验材料 | 第35页 |
| 3.1.1 菌株 | 第35页 |
| 3.1.2 主要仪器及试剂 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-37页 |
| 3.2.1 总RNA的提取 | 第35页 |
| 3.2.2 第一条cDNA的反转录反应 | 第35-36页 |
| 3.2.3 灰树花法尼基焦磷酸合酶的cDNA全长获得 | 第36-37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-39页 |
| 3.3.1 灰树花法尼基焦磷酸合酶cDNA全长 | 第37页 |
| 3.3.2 法尼基焦磷酸合酶基因的生物信息学分析 | 第37-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 法尼基焦磷酸合酶的基因功能验证 | 第40-49页 |
| 4.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 4.1.1 菌株 | 第40页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第40-41页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-45页 |
| 4.2.1 总RNA的提取 | 第41页 |
| 4.2.2 第一条cDNA的反转录反应 | 第41页 |
| 4.2.3 酵母表达载体的构建 | 第41-43页 |
| 4.2.4 制备酵母感受态细胞和细胞质粒转化 | 第43页 |
| 4.2.5 酵母阳性转化子的鉴定 | 第43-44页 |
| 4.2.6 检测灰树花法尼基焦磷酸合酶酶活 | 第44-45页 |
| 4.3 结果与分析 | 第45-48页 |
| 4.3.1 灰树花法尼基焦磷酸合酶在酵母中进行表达 | 第45-46页 |
| 4.3.2 法尼基焦磷酸合酶酶活的检测 | 第46-48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-49页 |
| 第五章 RT-PCR检测法尼基焦磷酸合酶在不同诱导剂下的表达特性 | 第49-59页 |
| 5.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 5.1.1 菌株 | 第49-50页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第50页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第50页 |
| 5.2 实验方法 | 第50-53页 |
| 5.2.1 诱导剂的制备 | 第50页 |
| 5.2.2 种子发酵液的制备及培养 | 第50页 |
| 5.2.3 诱导剂诱导灰树花菌丝生长 | 第50-51页 |
| 5.2.4 总RNA的提取 | 第51页 |
| 5.2.5 第一条cDNA的获得 | 第51页 |
| 5.2.6 RT-PCR引物的设计及验证 | 第51-52页 |
| 5.2.7 实时定量RT-PCR | 第52-53页 |
| 5.3 实验结果 | 第53-58页 |
| 5.3.1 栗树树皮对灰树花法尼基焦磷酸合酶的表达量分析 | 第53-54页 |
| 5.3.2 栗树根际土对灰树花法尼基焦磷酸合酶的表达量分析 | 第54-55页 |
| 5.3.3 茉莉酸甲脂对于灰树花法尼基焦磷酸合酶的表达量分析 | 第55-56页 |
| 5.3.4 木麻黄弗兰克氏菌对于灰树花法尼基焦磷酸合酶的表达量分析 | 第56-58页 |
| 5.4 讨论分析 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-70页 |
| 作者简介 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
