| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 前言 | 第12页 |
| 1.2 RNAi | 第12-14页 |
| 1.2.1 RNA干扰的原理 | 第13页 |
| 1.2.2 RNA干扰的特点 | 第13-14页 |
| 1.3 RNA干扰介导的方法 | 第14-16页 |
| 1.3.1 注射法 | 第14页 |
| 1.3.2 饲喂法 | 第14-15页 |
| 1.3.3 浸液法 | 第15页 |
| 1.3.4 转基因植物 | 第15-16页 |
| 1.4 RNA干扰的应用 | 第16-17页 |
| 1.4.1 在基因治疗中的应用 | 第16页 |
| 1.4.2 在基因功能研究中的应用 | 第16页 |
| 1.4.3 在植物改良中的应用 | 第16-17页 |
| 1.5 在昆虫防治中的应用 | 第17-19页 |
| 1.6 RNAi应用于昆虫防治的问题和展望 | 第19页 |
| 1.7 小地老虎 | 第19-20页 |
| 1.8 V-ATP酶 | 第20-22页 |
| 1.8.1 V-ATP酶的结构和功能 | 第20-21页 |
| 1.8.2 昆虫V-ATP酶的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.9 研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 小地老虎V-ATP酶A亚基和B亚基基因全长的克隆 | 第23-45页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第23页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.3.1 小地老虎总RNA的提取 | 第24页 |
| 2.3.2 特异引物设计 | 第24-25页 |
| 2.3.3 保守序列扩增 | 第25-26页 |
| 2.3.4 合成 3′和 5′-RACE-Ready cDNA | 第26-28页 |
| 2.3.5 cDNA3′末端和 5′末端的克隆 | 第28-29页 |
| 2.3.6 连接转化 | 第29-30页 |
| 2.3.7 测序拼接及CDS区的获得 | 第30页 |
| 2.3.8 基因序列分析及系统进化性分析 | 第30页 |
| 2.4 结果分析 | 第30-43页 |
| 2.4.1 小地老虎总RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.4.2 保守序列的扩增 | 第31-33页 |
| 2.4.3 A亚基 3'和 5'末端的克隆 | 第33-35页 |
| 2.4.4 B亚基 3'和 5'末端的克隆 | 第35-37页 |
| 2.4.5 A亚基基因CDS区的克隆及序列分析 | 第37-41页 |
| 2.4.6 B亚基基因CDS区的克隆及序列分析 | 第41-43页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 SiRNA的设计与筛选 | 第45-51页 |
| 3.1 前言 | 第45-46页 |
| 3.2 材料与试剂 | 第46页 |
| 3.2.1 主要试剂与材料 | 第46页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第46页 |
| 3.3 实验方法： | 第46-48页 |
| 3.3.1 SiRNA的设计合成及注射 | 第46页 |
| 3.3.2 显微注射 | 第46-47页 |
| 3.3.3 定量引物设计 | 第47页 |
| 3.3.4 干扰结果检测 | 第47-48页 |
| 3.3.5 定量结果分析 | 第48页 |
| 3.4 结果分析 | 第48-49页 |
| 3.4.1 定量引物标准曲线 | 第48-49页 |
| 3.4.2 定量结果分析 | 第49页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 杆状病毒表达系统的构建 | 第51-65页 |
| 4.1 前言 | 第51页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第51-52页 |
| 4.2.1 主要材料 | 第51-52页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第52页 |
| 4.3 实验方法 | 第52-58页 |
| 4.3.1 穿梭载体的构建 | 第52-54页 |
| 4.3.2 细胞培养 | 第54-55页 |
| 4.3.3 转染并重组病毒表达载体 | 第55-56页 |
| 4.3.4 噬斑实验 | 第56-57页 |
| 4.3.5 杆状病毒遗传稳定性 | 第57-58页 |
| 4.3.6 杆状病毒对小地老虎的干扰效果检测 | 第58页 |
| 4.4 结果分析 | 第58-63页 |
| 4.4.1 穿梭载体的构建 | 第58-59页 |
| 4.4.2 重组杆状病毒 | 第59页 |
| 4.4.3 杆状病毒遗传稳定性 | 第59-62页 |
| 4.4.4 对小地老虎的干扰效果检测 | 第62-63页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 附录 | 第73-76页 |
| 缩略词 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78页 |