| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号表 | 第7-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 纤维素酶的研究现状 | 第11-12页 |
| 1.1.1 纤维素酶简介 | 第11页 |
| 1.1.2 纤维素酶菌种的筛育 | 第11-12页 |
| 1.2 纤维素酶在畜牧行业的应用 | 第12-15页 |
| 1.2.1 纤维素酶的营养功能 | 第12-13页 |
| 1.2.2 纤维素酶在生产实践中的应用 | 第13-15页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第15-17页 |
| 1.3.1 枯草芽孢杆菌表达系统简介 | 第15-16页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌在畜牧业上的应用 | 第16-17页 |
| 1.4 基因工程的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.4.1 基因工程 | 第17页 |
| 1.4.2 基因工程的应用价值 | 第17-19页 |
| 1.5 研究目的 | 第19-21页 |
| 第2章 纤维素酶基因CelKg整合载体的构建 | 第21-35页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 试剂与酶 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第22页 |
| 2.1.4 引物的设计与合成 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-28页 |
| 2.2.1 培养基及相关试剂的配置 | 第22-23页 |
| 2.2.2 质粒的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.3 启动子P43，同源片段M1、M2的克隆 | 第24-26页 |
| 2.2.4 整合载体pGEM-Kmpgt的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.5 重组大肠杆菌Kpg的筛选 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-32页 |
| 2.3.1 启动子P43，同源片段M1、M2基因的克隆及回收 | 第28-29页 |
| 2.3.2 整合载体pGEM-Kmpgmt的构建 | 第29-31页 |
| 2.3.3 重组大肠杆菌Kpg的构建 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-35页 |
| 第3章 野生型B.subtilis LN感受态的制备 | 第35-45页 |
| 3.1 材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第35页 |
| 3.1.2 主要仪器和设备 | 第35-36页 |
| 3.2 方法 | 第36-39页 |
| 3.2.1 溶液的配置 | 第36页 |
| 3.2.2 培养基的配置 | 第36页 |
| 3.2.3 野生型B.subtilis LN感受态的制备 | 第36-37页 |
| 3.2.4 不同有机溶剂对野生型B.subtilis LN感受态细胞转化效率的影响 | 第37-39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-42页 |
| 3.3.1 吐温-80 对野生型B.subtilis LN感受态的制备和转化效率的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.2 甲醇对野生型B.subtilis LN感受态的制备和转化效率的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.3 丙酮对野生型B.subtilis LN感受态的制备和转化效率的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.4 转化子的PCR验证 | 第42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-45页 |
| 第4章 重组菌B.subtilis Kpg的构建及酶活性分析 | 第45-59页 |
| 4.1 材料 | 第45-46页 |
| 4.1.1 菌种和质粒 | 第45页 |
| 4.1.2 仪器和设备 | 第45-46页 |
| 4.2 方法 | 第46-50页 |
| 4.2.1 溶液的配置 | 第46页 |
| 4.2.2 培养基的配置 | 第46-47页 |
| 4.2.3 重组菌B.subtilis Kpg的构建和分离鉴定 | 第47-48页 |
| 4.2.4 重组菌B.subtilis Kpg生长曲线的绘制 | 第48页 |
| 4.2.5 纤维素酶活测定方法 | 第48-49页 |
| 4.2.6 培养时间对重组菌B.subtilis Kpg纤维素酶活性的分析 | 第49页 |
| 4.2.7 不同温度对重组菌B.subtilis Kpg纤维素酶活性的分析 | 第49页 |
| 4.2.8 不同pH对重组菌B.subtilis Kpg纤维素酶活性的分析 | 第49-50页 |
| 4.3 结果与分析 | 第50-55页 |
| 4.3.1 重组菌B.subtilis Kpg的构建 | 第50页 |
| 4.3.2 重组菌B.subtilis Kpg的分离鉴定 | 第50-52页 |
| 4.3.3 重组菌生长曲线和葡糖糖标准曲线的绘制 | 第52-53页 |
| 4.3.4 培养时间对重组菌B.subtilis Kpg纤维素酶活性的影响 | 第53页 |
| 4.3.5 不同温度对重组菌B.subtilis Kpg纤维素酶活性的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.6 不同pH对重组菌B.subtilis Kpg纤维素酶活性的影响 | 第54-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-59页 |
| 第5章 重组菌B.subtilis Kpg对发酵麸皮的影响 | 第59-67页 |
| 5.1 材料 | 第59-60页 |
| 5.1.1 菌种和试剂 | 第59页 |
| 5.1.2 仪器设备 | 第59-60页 |
| 5.2 方法 | 第60-63页 |
| 5.2.1 发酵培养基和相关试剂的配置 | 第60页 |
| 5.2.2 麸皮发酵试验 | 第60页 |
| 5.2.3 发酵麸皮水分含量的测定 | 第60-61页 |
| 5.2.4 发酵麸皮粗纤维含量的测定 | 第61-62页 |
| 5.2.5 发酵麸皮真蛋白含量的测定 | 第62-63页 |
| 5.3 结果 | 第63-64页 |
| 5.3.1 重组菌B.subtilis Kpg对麸皮粗纤维含量的影响 | 第63页 |
| 5.3.2 重组菌B.subtilis Kpg对麸皮真蛋白含量地影响 | 第63-64页 |
| 5.4 讨论 | 第64-67页 |
| 第6章 结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-81页 |
| 附录Ⅰ 质粒pGEM-Kpgt测序结果 | 第81-85页 |
| 附录Ⅱ 质粒pGEM-Kmpgt测序结果 | 第85-91页 |
| 附录Ⅲ 质粒pGEM-Kmpgmt测序结果 | 第91-97页 |
| 致谢 | 第97-99页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第99页 |
