| 符号说明 | 第5-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-16页 |
| 1.1 KRAB型锌指蛋白 | 第12页 |
| 1.2 ZNF496（Zinc Finger Protein 496） | 第12-13页 |
| 1.3 酵母双杂交 | 第13-15页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-30页 |
| 2.1 菌种、质粒和细胞系 | 第16页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第16-17页 |
| 2.3 主要试剂 | 第17页 |
| 2.4 细胞培养及瞬时转染 | 第17-18页 |
| 2.5 酵母双杂交试验 | 第18-21页 |
| 2.5.1 诱饵质粒转化酵母菌Y2HGold | 第18页 |
| 2.5.2 自激活检测 | 第18页 |
| 2.5.3 人胎肝文库转化诱饵酵母菌（筛库） | 第18-19页 |
| 2.5.4 X-Gal滤纸转移试验 | 第19-20页 |
| 2.5.5 回转验证 | 第20-21页 |
| 2.6 双荧光素酶报告基因检测 | 第21-22页 |
| 2.7 亚细胞共定位 | 第22页 |
| 2.8 免疫共沉淀 | 第22-23页 |
| 2.9 Western blot | 第23-24页 |
| 2.10 过表达稳定株的建立 | 第24-25页 |
| 2.11 细胞克隆形成试验 | 第25-26页 |
| 2.12 CCK-8 细胞增殖试验 | 第26页 |
| 2.13 质粒载体的构建 | 第26-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-47页 |
| 3.1 酵母双杂交法筛选ZNF496相互作用蛋白 | 第30-33页 |
| 3.1.1 自激活检测 | 第30-31页 |
| 3.1.2 顺转筛库结果 | 第31页 |
| 3.1.3 X-gal结果 | 第31-32页 |
| 3.1.4 回转验证结果 | 第32-33页 |
| 3.2 ZNF496相互作用的验证 | 第33-39页 |
| 3.2.1 ZNF496C2HR区与RelA结合 | 第33-35页 |
| 3.2.2 ZNF496对NF-κB信号通路的转录抑制 | 第35-36页 |
| 3.2.3 ZNF496与ESRRA有相互作用 | 第36-37页 |
| 3.2.4 ZNF496与OS9，C1QTNF1相互作用的验证 | 第37-38页 |
| 3.2.5 MG132抑制OTUD4存在下ZNF496的表达 | 第38-39页 |
| 3.3 ZNF496抑制ERα 的转录调控 | 第39-45页 |
| 3.3.1 RFP 496载体的构建 | 第39-41页 |
| 3.3.2 ZNF496与ERα 共定位于细胞核 | 第41-42页 |
| 3.3.3 过表达ZNF496与ERα 在MCF-7 细胞中有相互作用 | 第42页 |
| 3.3.4 ZNF496与ERα 相互作用的结构域 | 第42-43页 |
| 3.3.5 ZNF496抑制ERα 的转录活性 | 第43-45页 |
| 3.4 ZNF496过表达稳定株抑制MCF-7 细胞增殖 | 第45-47页 |
| 3.4.1 过表达稳定株的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.4.2 细胞克隆形成试验 | 第46页 |
| 3.4.3 CCK-8 细胞增殖试验 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-55页 |
| 4.1 酵母双杂交法筛选ZNF496相互作用蛋白 | 第47-49页 |
| 4.2 ZNF496相互作用验证 | 第49-51页 |
| 4.3 ZNF496抑制ERα 的转录调控 | 第51-53页 |
| 4.4 ZNF496过表达稳定株抑制MCF-7 细胞增殖 | 第53-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 6 参考文献 | 第56-61页 |
| 7 附录 | 第61-65页 |
| 8 致谢 | 第65-66页 |
| 9 攻读学位期间发表论文情况 | 第66页 |
