| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-15页 |
| 1.1 低聚果糖概述 | 第10页 |
| 1.1.1 低聚果糖的来源和化学结构 | 第10页 |
| 1.1.2 低聚果糖生理功能 | 第10页 |
| 1.2 果糖基转移酶 | 第10-12页 |
| 1.2.1 果糖基转移酶催化机理 | 第10-11页 |
| 1.2.2 果糖基转移酶的来源 | 第11页 |
| 1.2.3 果糖基转移酶的酶学性质 | 第11-12页 |
| 1.2.4 果糖基转移酶的生产 | 第12页 |
| 1.3 果糖基转移酶的结构与分子改造 | 第12-13页 |
| 1.4 论文主要研究内容 | 第13-15页 |
| 1.4.1 立题依据及意义 | 第13-14页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第15-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 酶和试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.3 主要培养基 | 第16页 |
| 2.1.4 仪器和设备 | 第16-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-25页 |
| 2.2.1 黑曲霉染色体DNA的提取 | 第17-18页 |
| 2.2.2 基本分子操作 | 第18页 |
| 2.2.3 果糖基转移酶基因引物设计及PCR | 第18页 |
| 2.2.4 重组质粒pPIC9K-fru的构建 | 第18页 |
| 2.2.5 P. pastoris的转化及重组菌P. pastoris FruSG的筛选 | 第18-19页 |
| 2.2.6 果糖基转移酶酶活定义及测定方法 | 第19页 |
| 2.2.7 重组菌P. pastoris FruSG摇瓶发酵优化 | 第19-20页 |
| 2.2.8 重组菌P. pastoris FruSG 5 L发酵罐发酵优化 | 第20页 |
| 2.2.9 重组酶的分离纯化 | 第20-21页 |
| 2.2.10 SDS-PAGE分析和蛋白浓度测定 | 第21页 |
| 2.2.11 重组酶的酶学性质 | 第21-22页 |
| 2.2.12 低聚果糖的合成测定 | 第22页 |
| 2.2.13 果糖基转移酶定点突变方法 | 第22-23页 |
| 2.2.14 葡萄糖氧化酶（GOD）目的基因的扩增 | 第23页 |
| 2.2.15 重组质粒pPIC9K-GOD构建及重组菌P. pastoris GOD筛选 | 第23页 |
| 2.2.16 葡萄糖氧化酶酶活定义及测定方法 | 第23页 |
| 2.2.17 果糖基转移酶和葡萄糖氧化酶融合 | 第23-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-52页 |
| 3.1 果糖基转移酶基因在P. pastoris中的异源表达与酶学性质分析 | 第25-31页 |
| 3.1.1 果糖基转移酶基因的获得 | 第25页 |
| 3.1.2 表达果糖基转移酶重组质粒构建 | 第25-26页 |
| 3.1.3 表达果糖基转移酶重组P. pastoris FruSG的构建及发酵 | 第26-27页 |
| 3.1.4 重组P. pastoris FruSG果糖基转移酶纯化分析 | 第27-28页 |
| 3.1.5 重组酶的酶学性质分析 | 第28-31页 |
| 3.2 重组P. pastoris FruSG发酵优化 | 第31-37页 |
| 3.2.1 重组P. pastoris FruSG摇瓶水平发酵优化 | 第31-35页 |
| 3.2.2 不同溶氧水平对重组P. pastoris FruSG在 5 L发酵罐中产酶影响 | 第35-37页 |
| 3.3 定点突变提高果糖基转移酶的催化效率 | 第37-42页 |
| 3.3.1 果糖基转移酶的 3-D结构模拟构建分析 | 第37-38页 |
| 3.3.2 果糖基转移酶催化效率提高突变位点的确定 | 第38-39页 |
| 3.3.3 突变体的酶活力测定 | 第39页 |
| 3.3.4 定点突变提高果糖基转移酶的催化效率 | 第39-40页 |
| 3.3.5 突变体C66N催化效率提高方面的结构解析 | 第40-41页 |
| 3.3.6 突变体C66N温度稳定性与pH稳定性分析 | 第41-42页 |
| 3.3.7 突变体C66N稳定性提高方面的结构解析 | 第42页 |
| 3.4 定点突变提高果糖基转移酶的热稳定性 | 第42-45页 |
| 3.4.1 热稳定性突变位点的确定 | 第42-43页 |
| 3.4.2 突变体的酶活力测定 | 第43页 |
| 3.4.3 基于定点突变对重组果糖基转移酶热稳定性的影响 | 第43-44页 |
| 3.4.4 突变体稳定性提高方面的结构解析 | 第44-45页 |
| 3.4.5 突变体Q159I和E617F的反应动力学参数测定 | 第45页 |
| 3.5 果糖基转移酶与葡萄糖氧化酶的融合表达对低聚果糖纯度的影响 | 第45-52页 |
| 3.5.1 外源添加蔗糖对葡萄糖氧化酶酶活力的影响 | 第45-46页 |
| 3.5.2 外源添加葡萄糖氧化酶对低聚果糖产率的影响 | 第46页 |
| 3.5.3 葡萄糖氧化酶基因的克隆及重组载体的构建 | 第46-47页 |
| 3.5.4 葡萄糖氧化酶重组P. pastoris GOD的构建及发酵 | 第47-48页 |
| 3.5.5 重组质粒pPIC9K-GOD-Fru的构建 | 第48-49页 |
| 3.5.6 融合酶的表达 | 第49页 |
| 3.5.7 低聚果糖的合成 | 第49-52页 |
| 主要结论与展望 | 第52-54页 |
| 主要结论 | 第52-53页 |
| 展望 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第59页 |
