| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-31页 |
| 1.1 NAC转录因子研究进展 | 第13-23页 |
| 1.1.1 NAC转录因子的结构及功能特点 | 第13-14页 |
| 1.1.2 NAC转录因子的晶体结构特征 | 第14-15页 |
| 1.1.3 NAC转录因子的分类 | 第15-16页 |
| 1.1.4 NAC转录因子的调控 | 第16-18页 |
| 1.1.4.1 转录调控 | 第16页 |
| 1.1.4.2 转录后调控 | 第16-17页 |
| 1.1.4.3 翻译后调控 | 第17页 |
| 1.1.4.4 转录调节活性的调节 | 第17-18页 |
| 1.1.4.5 NAC基因的表达 | 第18页 |
| 1.1.5 NAC转录因子的生物学功能 | 第18-23页 |
| 1.1.5.1 参与顶端分生组织的形成 | 第19页 |
| 1.1.5.2 参与细胞分裂的调控 | 第19-20页 |
| 1.1.5.3 参与细胞次生壁的合成 | 第20页 |
| 1.1.5.4 参与植物侧根形成和生长素信号 | 第20-21页 |
| 1.1.5.5 参与植物衰老调控 | 第21页 |
| 1.1.5.6 参与非生物胁迫的响应 | 第21-22页 |
| 1.1.5.7 参与生物胁迫的响应 | 第22-23页 |
| 1.2 低温胁迫对植物的影响及其信号通路的研究 | 第23-30页 |
| 1.2.1 低温胁迫对植物的影响 | 第23-27页 |
| 1.2.1.1 低温对生物膜系统的影响 | 第24页 |
| 1.2.1.2 低温对抗氧化系统的影响 | 第24-25页 |
| 1.2.1.3 低温胁迫下植物体内渗透调节物质的积累 | 第25-26页 |
| 1.2.1.4 低温对光合作用的影响 | 第26-27页 |
| 1.2.2 低温信号的转导 | 第27-28页 |
| 1.2.3 低温信号通路 | 第28-30页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第30-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第31页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第31页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第31页 |
| 2.1.4 PCR及qPCR引物 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-50页 |
| 2.2.1 番茄的栽培及胁迫处理 | 第32页 |
| 2.2.2 植物总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.3 反转录cDNA第一条链的合成 | 第33-34页 |
| 2.2.4 SlNAM1基因的分离 | 第34-35页 |
| 2.2.4.1 PCR反应扩增目的片段 | 第34页 |
| 2.2.4.2 目的片段的回收 | 第34-35页 |
| 2.2.5 目的片段与克隆载体的连接 | 第35页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态的制备及载体的转化 | 第35-36页 |
| 2.2.6.1 大肠杆菌感受态的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.6.2 大肠杆菌的转化及阳性克隆的筛选 | 第36页 |
| 2.2.7 大肠杆菌质粒的提取（试剂盒） | 第36-37页 |
| 2.2.8 重组克隆载体的酶切鉴定 | 第37页 |
| 2.2.9 DNA序列测定 | 第37页 |
| 2.2.10 SlNAM1的亚细胞定位 | 第37-40页 |
| 2.2.10.1 SlNAM1-GFP载体的构建 | 第37-38页 |
| 2.2.10.2 农杆菌感受态的制备 | 第38页 |
| 2.2.10.3 冻融法转化农杆菌 | 第38-39页 |
| 2.2.10.4 瞬时转化本生烟草叶片 | 第39页 |
| 2.2.10.5 SlNAM1在烟草中的稳定表达 | 第39-40页 |
| 2.2.11 SlNAM1的转录激活活性检测 | 第40-42页 |
| 2.2.11.1 BD载体的构建 | 第40-41页 |
| 2.2.11.2 酵母感受态细胞的制备 | 第41页 |
| 2.2.11.3 酵母的转化及阳性克隆的筛选 | 第41-42页 |
| 2.2.11.4 转录激活活性的鉴定 | 第42页 |
| 2.2.12 真核表达载体的构建 | 第42页 |
| 2.2.13 转基因烟草的转化和鉴定 | 第42-44页 |
| 2.2.13.1 SDS法提取基因组DNA | 第42-43页 |
| 2.2.13.2 转基因的烟草的PCR鉴定 | 第43-44页 |
| 2.2.13.3 转基因烟草的qRT-PCR检测 | 第44页 |
| 2.2.14 烟草种子的萌发实验 | 第44-45页 |
| 2.2.14.1 烟草种子的无菌处理 | 第44页 |
| 2.2.14.2 种子萌发条件 | 第44-45页 |
| 2.2.15 烟草成苗的低温抗性分析 | 第45页 |
| 2.2.16 相关生理指标的测定 | 第45-48页 |
| 2.2.16.1 膜脂过氧化程度和电解质外渗量的测定 | 第45页 |
| 2.2.16.2 脯氨酸和可溶性糖含量的测定 | 第45-46页 |
| 2.2.16.3 光合速率的测定 | 第46页 |
| 2.2.16.4 H_2O_2和O_2~(·?)的染色分析和定量测定 | 第46-47页 |
| 2.2.16.5 抗氧化酶SOD和APX的活性测定 | 第47-48页 |
| 2.2.17 SlICE1a与SlNAM1启动子的互作分析 | 第48-49页 |
| 2.2.17.1 AD-ICE1a与SlNAM1-Pro-p Abai载体的构建 | 第48页 |
| 2.2.17.2 SlNAM1-Pro-p Abai载体转化酵母菌株 | 第48页 |
| 2.2.17.3 SlNAM1-Pro-Abai酵母菌株的Ab Ar抗性检测 | 第48页 |
| 2.2.17.4 SlNAM1-Pro-Abai酵母菌株感受态制备和p GADT7-ICE1a的转化 | 第48-49页 |
| 2.2.18 数据的处理与分析 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-64页 |
| 3.1 SlNAM1基因的分离及其特征 | 第50-52页 |
| 3.1.1 SlNAM1基因全长的克隆 | 第50页 |
| 3.1.2 SlNAM1基因的序列分析及其编码的氨基酸序列分析 | 第50-52页 |
| 3.2 SlNAM1蛋白的亚细胞定位 | 第52-54页 |
| 3.3 SlNAM1的转录激活活性分析 | 第54-55页 |
| 3.3.1 SlNAM1蛋白与GAL4-BD的构建 | 第54页 |
| 3.3.2 SlNAM1转录激活活性的检测 | 第54-55页 |
| 3.4 SlNAM1的表达模式分析 | 第55-56页 |
| 3.5 SlNAM1在烟草中的遗传转化 | 第56-58页 |
| 3.5.1 SlNAM1真核表达载体的构建 | 第56页 |
| 3.5.2 转基因烟草的获得和筛选 | 第56-58页 |
| 3.6 过表达SlNAM1提高了转基因烟草的耐低温能力 | 第58-59页 |
| 3.6.1 过表达SlNAM1对低温胁迫下种子的影响 | 第58页 |
| 3.6.2 过表达SlNAM1对低温胁迫下烟草成苗及其光合速率Pn的影响 | 第58-59页 |
| 3.7 过表达SlNAM1减少了烟草体内低温胁迫下活性氧的积累 | 第59-61页 |
| 3.7.1 过表达SlNAM1降低了低温胁迫下烟草体内H_2O_2和O_2~(·?)的积累 | 第59-60页 |
| 3.7.2 抗氧化关建酶SOD和APX活性检测及其合成基因的表达情况 | 第60-61页 |
| 3.8 过表达SlNAM1减轻了生物膜遭受的氧化伤害 | 第61页 |
| 3.9 过表达SlNAM1提高了低温胁迫下烟草植株渗透调节物质的含量 | 第61-62页 |
| 3.10 过表达SlNAM1提高了转基因烟草中一些胁迫相关基因的表达 | 第62-63页 |
| 3.11 SlICE1与SlNAM1启动子的酵母单杂交分析 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-69页 |
| 4.1 SlNAM1是NAC家族的转录因子 | 第64页 |
| 4.2 SlNAM1受多种胁迫和激素的诱导表达 | 第64-65页 |
| 4.3 过表达SlNAM1提高了转基因烟草的低温抗性 | 第65-67页 |
| 4.3.1 过表达SlNAM1降低了低温下烟草体内活性氧的积累 | 第66页 |
| 4.3.2 过表达SlNAM1减轻了低温胁迫下细胞膜遭受的损害 | 第66-67页 |
| 4.3.3 过表达SlNAM1提高了低温胁迫下转基因烟草渗透调节物质的含量 | 第67页 |
| 4.4 过表达SlNAM1上调了烟草DREB1基因的表达 | 第67-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第83页 |
