| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| 1.1 氮素 | 第13-15页 |
| 1.1.1 氮素对植物生长发育的影响 | 第13页 |
| 1.1.2 氮肥对农业和环境的影响 | 第13-15页 |
| 1.2 植物体中氮素的吸收、转运与同化 | 第15-19页 |
| 1.2.1 植物中硝态氮的吸收与转运 | 第15-18页 |
| 1.2.2 植物中硝态氮的同化作用 | 第18-19页 |
| 1.2.2.1 硝酸盐的还原 | 第18-19页 |
| 1.2.2.2 亚硝酸盐的还原 | 第19页 |
| 1.3 植物中的硝态氮调控基因 | 第19-21页 |
| 1.4 硝态氮调控突变体筛选系统 | 第21-22页 |
| 1.5 EMS诱变 | 第22页 |
| 1.6 图位克隆 | 第22-24页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-30页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第27-28页 |
| 2.1.4 引物 | 第28-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-46页 |
| 2.2.1 拟南芥的生长及材料准备 | 第30-31页 |
| 2.2.1.1 种子的播种 | 第30页 |
| 2.2.1.2 植株的生长 | 第30页 |
| 2.2.1.3 种子的收集 | 第30-31页 |
| 2.2.2 种子的消毒处理 | 第31页 |
| 2.2.3 材料的固体培养 | 第31-32页 |
| 2.2.3.1 培养基的配制 | 第31页 |
| 2.2.3.2 材料的点播与培养 | 第31-32页 |
| 2.2.4 材料的液体培养基培养 | 第32-33页 |
| 2.2.4.1 培养基的配制 | 第32页 |
| 2.2.4.2 六孔板培养法 | 第32页 |
| 2.2.4.3 Magenta Box培养法 | 第32-33页 |
| 2.2.5 拟南芥的杂交 | 第33页 |
| 2.2.6 拟南芥硝酸调控基因筛选系统的EMS诱变 | 第33-34页 |
| 2.2.6.1 EMS用量的计算 | 第33页 |
| 2.2.6.2 播种规模的计算 | 第33-34页 |
| 2.2.6.3 EMS诱变 | 第34页 |
| 2.2.7 荧光筛选突变体 | 第34-36页 |
| 2.2.7.1 筛选策略 | 第34页 |
| 2.2.7.2 材料的准备 | 第34-35页 |
| 2.2.7.3 荧光筛选 | 第35-36页 |
| 2.2.8 突变体背景清除 | 第36-37页 |
| 2.2.9 突变基因显隐性的鉴定 | 第37页 |
| 2.2.10 拟南芥基因组的提取 | 第37页 |
| 2.2.11 PCR扩增 | 第37-38页 |
| 2.2.12 拟南芥总RNA的提取（试剂盒法） | 第38-39页 |
| 2.2.13 反转录 | 第39页 |
| 2.2.14 Phusion PCR扩增 | 第39-40页 |
| 2.2.15 基因测序 | 第40页 |
| 2.2.16 图位克隆 | 第40-41页 |
| 2.2.16.1 材料的准备 | 第40页 |
| 2.2.16.2 粗定位 | 第40-41页 |
| 2.2.16.3 精细定位 | 第41页 |
| 2.2.17 突变体的硝态氮含量测定 | 第41-42页 |
| 2.2.17.1 标准曲线的制作 | 第41页 |
| 2.2.17.2 材料的准备 | 第41-42页 |
| 2.2.17.3 硝态氮含量的测定 | 第42页 |
| 2.2.18 突变体硝酸还原酶（NR）活性测定 | 第42-44页 |
| 2.2.18.1 标准曲线的制作 | 第42-43页 |
| 2.2.18.2 材料的准备 | 第43页 |
| 2.2.18.3 硝酸还原酶活性的测定 | 第43-44页 |
| 2.2.19 突变体的氨基酸含量测定 | 第44-46页 |
| 2.2.19.1 标准曲线的制作 | 第44页 |
| 2.2.19.2 材料的准备 | 第44页 |
| 2.2.19.3 氨基酸含量的测定 | 第44-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-60页 |
| 3.1 拟南芥的EMS诱变 | 第46页 |
| 3.2 拟南芥硝态氮调控突变体的荧光筛选 | 第46-48页 |
| 3.3 突变基因的确定 | 第48-53页 |
| 3.3.1 Mut136中突变基因的显隐性鉴定 | 第48页 |
| 3.3.2 Mut136的图位克隆 | 第48-52页 |
| 3.3.2.1 粗定位 | 第48-51页 |
| 3.3.2.2 精细定位 | 第51-52页 |
| 3.3.3 高通量测序 | 第52-53页 |
| 3.4 Mut136中NO_3~-诱导基因的表达量 | 第53页 |
| 3.5 Mut136中已知硝态氮调控基因的表达量 | 第53-54页 |
| 3.6 突变体表型鉴定 | 第54-57页 |
| 3.6.1 植株表型鉴定 | 第54-55页 |
| 3.6.2 根形态鉴定 | 第55-57页 |
| 3.6.2.1 不同硝态氮浓度下根形态鉴定 | 第55-57页 |
| 3.7 Mut136硝态氮含量 | 第57-58页 |
| 3.8 Mut136中NR活性 | 第58页 |
| 3.9 Mut136中氨基酸含量 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71页 |