| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 稻瘟病菌的研究概况 | 第11-13页 |
| 1.1.1 稻瘟病菌的简介 | 第11页 |
| 1.1.2 稻瘟病菌的侵染机制 | 第11-13页 |
| 1.2 液泡对真菌的作用 | 第13页 |
| 1.3 小GTP酶在液泡融合过程中的作用 | 第13-15页 |
| 1.3.1 小GTP酶的功能循环 | 第13-14页 |
| 1.3.2 酵母的小GTP酶调节胞吞和胞吐过程 | 第14-15页 |
| 1.4 粘附因子在液泡融合过程中的作用 | 第15-17页 |
| 1.4.1 膜粘附的作用 | 第15-16页 |
| 1.4.2 粘附因子的种类 | 第16-17页 |
| 1.5 粘附因子在内吞溶酶体的融合过程中的作用 | 第17-21页 |
| 1.5.1 酵母HOPS和CORVET复合体的组成和功能 | 第17-18页 |
| 1.5.2 酵母HOPS复合体亚基的定位与功能 | 第18-19页 |
| 1.5.3 酵母HOPS复合体调节内吞溶酶体的生成和融合 | 第19页 |
| 1.5.4 酵母HOPS复合体调节液泡的生成 | 第19-21页 |
| 1.6 研究思路 | 第21页 |
| 1.6.1 稻瘟病菌HOPS复合体研究的目的与意义 | 第21页 |
| 1.6.2 稻瘟病菌HOPS复合体的研究方法 | 第21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.2 供试载体和图谱 | 第21-22页 |
| 2.3 稻瘟病菌MoVps41-GFP融合蛋白的构建 | 第22-23页 |
| 2.4 生化试剂 | 第23页 |
| 2.5 生长培养基的配方 | 第23-24页 |
| 2.6 CM胁迫培养基的母液配方 | 第24页 |
| 2.7 1/4 YG胁迫培养基的母液配方 | 第24-25页 |
| 2.8 MM胁迫培养基的配方 | 第25页 |
| 2.9 抗生素的配制和使用量 | 第25页 |
| 2.10 稻瘟病菌突变体互补转化子的获得方法 | 第25-30页 |
| 2.10.1 稻瘟病菌MoVPS41基因敲除转化子和互补转化子的验证引物设计 | 第25-26页 |
| 2.10.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 2.10.3 快速双酶切和无缝连接反应 | 第26-27页 |
| 2.10.4 大肠杆菌感受态细胞的转化和验证 | 第27页 |
| 2.10.5 稻瘟病菌原生质体的制备 | 第27-28页 |
| 2.10.6 稻瘟病菌原生质体的转化 | 第28-29页 |
| 2.10.7 稻瘟病菌转化子的保存 | 第29页 |
| 2.10.8 稻瘟病菌菌丝DNA的提取 | 第29页 |
| 2.10.9 稻瘟病菌基因组DNA的精提 | 第29-30页 |
| 2.11 DNA分子杂交方法 | 第30-34页 |
| 2.11.1 DNA的酶切和验证 | 第30页 |
| 2.11.2 DNA的变性转移(带电荷的膜)和探针纯化 | 第30-31页 |
| 2.11.3 DNA的固定 | 第31页 |
| 2.11.4 纯化探针 | 第31-32页 |
| 2.11.5 探针效价 | 第32页 |
| 2.11.6 预杂交 | 第32页 |
| 2.11.7 杂交 | 第32页 |
| 2.11.8 洗涤 | 第32-33页 |
| 2.11.9 免疫显色 | 第33页 |
| 2.11.10 缓冲液的配制 | 第33-34页 |
| 2.12 稻瘟病菌基本表型的相关试验 | 第34-35页 |
| 2.12.1 稻瘟病菌菌落生长速率的测定 | 第34页 |
| 2.12.2 稻瘟病菌无性生殖的诱导 | 第34-35页 |
| 2.12.3 稻瘟病菌有性生殖的诱导 | 第35页 |
| 2.13 稻瘟病菌致病性的测试试验 | 第35-36页 |
| 2.13.1 稻瘟病菌菌丝块的离体接种 | 第35页 |
| 2.13.2 稻瘟病菌菌丝尖端类附着胞结构的诱导 | 第35页 |
| 2.13.3 稻瘟病菌菌丝块接种大麦下表皮 | 第35-36页 |
| 2.13.4 水稻根部接种 | 第36页 |
| 2.13.5 水稻幼苗的活体喷雾接种 | 第36页 |
| 2.14 稻瘟病菌菌丝和孢子中的荧光观察 | 第36-37页 |
| 2.14.1 FM4-64染色稻瘟病菌的孢子 | 第36页 |
| 2.14.2 CMAC染色稻瘟病菌的菌丝 | 第36-37页 |
| 2.14.3 透射电子显微镜(TEM)稻瘟病菌菌丝中的液泡 | 第37页 |
| 2.14.4 显微镜观察 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-50页 |
| 3.1 稻瘟病菌MoVPS41基因的鉴定 | 第37-39页 |
| 3.2 稻瘟病菌△Movps41突变体的获得 | 第39-40页 |
| 3.3 稻瘟病菌△Movps41突变体的生长速率减慢 | 第40-41页 |
| 3.4 稻瘟病菌△Movps41突变体的有性生殖和无性生殖有缺陷 | 第41-42页 |
| 3.5 稻瘟病菌△Movps41突变体菌丝的致病性丧失 | 第42-44页 |
| 3.6 稻瘟病菌△Movps41突变体菌丝尖端类附着胞结构的观察 | 第44-45页 |
| 3.7 稻瘟病菌△Movps41突变体孢子的致病性丧失 | 第45-46页 |
| 3.8 稻瘟病菌MoVps41调控液泡的融合 | 第46-47页 |
| 3.9 稻瘟病菌MoVps41蛋白的亚细胞定位 | 第47-48页 |
| 3.10 稻瘟病菌△Movps41突变体对高浓度金属离子敏感 | 第48-49页 |
| 3.11 稻瘟病菌△Movps41突变体对胞外抑制剂敏感 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 4.1 MoVPS41基因的敲除降低了稻瘟病菌的生长速率 | 第50-51页 |
| 4.2 MoVPS41基因调控稻瘟病菌的有性生殖和无性生殖 | 第51页 |
| 4.3 稻瘟病菌△Movps41突变体丧失了致病性 | 第51-52页 |
| 4.4 稻瘟病菌MoVps41蛋白对液泡融合有重要功能 | 第52页 |
| 4.5 稻瘟病菌MoVps41蛋白的定位分析 | 第52页 |
| 4.6 稻瘟病菌△Movps41突变体对重金属离子敏感 | 第52页 |
| 4.7 稻瘟病菌△Movps41突变体对胞外抑制剂敏感 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 攻读学位期间的学术论文与研究成果 | 第60-61页 |
| 附表 | 第61-62页 |
| 附图 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
