| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-24页 |
| ·甲基营养菌简介 | 第13-17页 |
| ·甲基营养菌的分类 | 第13-14页 |
| ·甲基营养菌的一碳同化途径 | 第14-16页 |
| ·甲基营养菌的生活习性 | 第16页 |
| ·甲基营养菌的应用 | 第16-17页 |
| ·国内外甲基营养菌的研究进展 | 第17页 |
| ·L-丝氨酸的作用 | 第17-22页 |
| ·L-丝氨酸的生产现状 | 第18-19页 |
| ·L-丝氨酸的生产方法 | 第19页 |
| ·利用添加前体物发酵产L-丝氨酸的菌株 | 第19-21页 |
| ·影响L-丝氨酸产量的因素 | 第21-22页 |
| ·sdaA基因编码的丝氨酸脱水酶 | 第22页 |
| ·选题的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-38页 |
| ·实验所用的材料 | 第24页 |
| ·试验样品来源 | 第24页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·菌株生长所需的培养基、生长条件、保存方法 | 第24-26页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·菌株培养条件 | 第25页 |
| ·菌株保存 | 第25-26页 |
| ·抗生素及其浓度 | 第26页 |
| ·常用溶液和缓冲液及其配制方法 | 第26-27页 |
| ·菌株形态学和生理生化鉴定 | 第27-32页 |
| ·革兰氏染色 | 第27页 |
| ·类脂粒 | 第27-28页 |
| ·氧化酶试验 | 第28页 |
| ·接触酶试验 | 第28页 |
| ·糖、醇类发酵 | 第28页 |
| ·甲基红(M.R)、V-P试验 | 第28页 |
| ·淀粉水解 | 第28-29页 |
| ·纤维素水解 | 第29页 |
| ·七叶灵水解 | 第29页 |
| ·3-酮基乳糖测定 | 第29页 |
| ·硝酸盐还原试验 | 第29-30页 |
| ·反硝化试验 | 第30页 |
| ·脲酶试验 | 第30页 |
| ·吲哚试验 | 第30-31页 |
| ·精氨酸双水解酶试验 | 第31页 |
| ·明胶液化试验 | 第31页 |
| ·脂酶试验 | 第31页 |
| ·硫化氢试验 | 第31页 |
| ·牛奶水解试验 | 第31-32页 |
| ·菌株生长条件检测 | 第32页 |
| ·抗性验证试验 | 第32页 |
| ·碳源利用情况 | 第32页 |
| ·DNA G+Cmol%含量测定 | 第32页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第34页 |
| ·DNA的酶切 | 第34-35页 |
| ·DNA纯化 | 第35页 |
| ·胶回收纯化 | 第35页 |
| ·PCR产物纯化 | 第35页 |
| ·DNA的连接 | 第35页 |
| ·DNA的化学转化 | 第35-36页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·转化 | 第36页 |
| ·三亲本结合 | 第36-37页 |
| ·发酵L-丝氨酸的静息细胞体系 | 第37-38页 |
| 第三章 甲基营养型菌株的分离筛选 | 第38-49页 |
| ·取样时间与地点 | 第38页 |
| ·甲基营养型菌株的分离筛选 | 第38页 |
| ·初筛 | 第38页 |
| ·复筛 | 第38页 |
| ·菌株WGP07和WGM16的甲醇降解情况 | 第38-39页 |
| ·菌株WGP07的甲醇降解情况 | 第38-39页 |
| ·菌株WGM16的甲醇降解情况 | 第39页 |
| ·WGP07、WGM16和WGP35的形态观察 | 第39-41页 |
| ·WGP07的形态特征 | 第39-40页 |
| ·WGM16的形态特征 | 第40-41页 |
| ·WGP35的形态特征 | 第41页 |
| ·菌株WGP07、WGM16和WGP35的生长情况 | 第41-47页 |
| ·菌株WGP07的生长情况 | 第41-43页 |
| ·菌株WGM16的生长情况 | 第43-45页 |
| ·菌株WGP35的生长情况 | 第45-47页 |
| ·小结 | 第47-49页 |
| 第四章 甲基营养型菌株WGP07、WGM16、WGP35的鉴定 | 第49-59页 |
| ·菌株WGP07、WGM16和WGP35的分子生物学分析 | 第49-52页 |
| ·PCR扩增菌株16S rDNA | 第49-50页 |
| ·PCR产物与PMD18-T载体的连接与转化 | 第50页 |
| ·16S rDNA PCR产物的测序结果与分析 | 第50-52页 |
| ·菌株WGP07、WGM16和WGP35的碳源利用情况 | 第52-53页 |
| ·菌株WGP07的碳源利用情况 | 第52-53页 |
| ·菌株WGM16的碳源利用情况 | 第53页 |
| ·菌株WGP35的碳源利用情况 | 第53页 |
| ·菌株WGP07基因组DNA G+Cmol%含量及细胞脂肪酸含量检测 | 第53-54页 |
| ·基因组DNA G+Cmol%含量 | 第53页 |
| ·全细胞脂肪酸含量 | 第53-54页 |
| ·菌株WGP35、WGP07、WGM16的生理生化性质 | 第54-58页 |
| ·菌株基本性状 | 第54-55页 |
| ·抗性研究 | 第55页 |
| ·碳源利用情况 | 第55-56页 |
| ·菌株WGP07、WGM16、WGP35生化性质 | 第56-57页 |
| ·菌株WGP07、WGM16、WGP35 L-丝氨酸生产情况 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 第五章 突变sdaA基因对菌株WGP35产L-丝氨酸的影响 | 第59-74页 |
| ·WGP35中sdaA基因的克隆 | 第59-60页 |
| ·sdaA基因与pMD18-T载体的连接与转化 | 第60页 |
| ·sdaA基因测序结果的分析 | 第60-67页 |
| ·sdaA基因核苷酸序列分析 | 第60-64页 |
| ·sdaA基因编码的氨基酸序列分析 | 第64-65页 |
| ·sdaA基因编码的丝氨酸脱水酶的蛋白质功能结构域 | 第65-67页 |
| ·sdaA基因突变体的构建 | 第67-71页 |
| ·sdaA基因部分片段的扩增 | 第68-69页 |
| ·sdaA基因部分片段与PK18mob连接 | 第69页 |
| ·PK18mob-psdaA重组质粒验证正反向 | 第69-70页 |
| ·三亲本结合 | 第70页 |
| ·sdaA基因突变体的验 | 第70-71页 |
| ·菌株生长情况分析 | 第71-73页 |
| ·菌株对不同碳源的利用情况 | 第71-72页 |
| ·菌株生长曲线 | 第72-73页 |
| ·菌株产L-丝氨酸情况分析 | 第73-74页 |
| 第六章 总结与讨论 | 第74-77页 |
| ·菌株WGP35的特性 | 第74页 |
| ·菌株WGP07的特性 | 第74页 |
| ·菌株WGM16的特性 | 第74-75页 |
| ·突变sdaA基因对菌株产L-丝氨酸的影响 | 第75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 附录一 | 第85-89页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第89页 |
