| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 缩略语 | 第10-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-22页 |
| 1 含TBC域的蛋白家族研究进展 | 第15-17页 |
| 2 TBC1D15的研究现状 | 第17-18页 |
| 3 Rab-GAP活性机制及研究方法 | 第18-19页 |
| 4 酶学研究基本方法和进展 | 第19-20页 |
| 5 进化生物学研究概况 | 第20-22页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第22-25页 |
| 1 实验目的、意义 | 第22页 |
| 2 实验内容 | 第22-24页 |
| 3 实验流程图 | 第24-25页 |
| 第三章 TBC1D15基因克隆及重组质粒构建和表达 | 第25-35页 |
| 1 材料与试剂 | 第25-28页 |
| 1.1 材料 | 第25页 |
| 1.2 试剂 | 第25-28页 |
| 2 方法 | 第28-32页 |
| 2.1 CaCl2法制备E. coli BL21感受态细胞 | 第28页 |
| 2.2 质粒转化 | 第28-29页 |
| 2.3 TBC1D15蛋白原核表达纯化 | 第29-30页 |
| 2.4 pET-28a(+) Shark TBC1D15和pET-32a(+) Shark TBC1D15重组质粒的构建 | 第30-31页 |
| 2.5 CaCl2法制备E. coli TG1感受态细胞 | 第31页 |
| 2.6 连接产物转化 | 第31页 |
| 2.7 蛋白pET-28a(+) Shark TBC1D15、pET-32a(+) Shark TBC1D15原核表达 | 第31-32页 |
| 3 实验结果 | 第32-34页 |
| 3.1 融合蛋白His-sumo-Shark TBC1D15原核表达纯化 | 第32-33页 |
| 3.2 重组质粒pET-28a(+) Shark TBC1D15、pET-32a(+) Shark TBC1D15鉴定 | 第33页 |
| 3.3 重组质粒pET-28a(+) Shark TBC1D15、pET-32a(+) Shark TBC1D15原核表达 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-35页 |
| 第四章 不同物种TBC1D15-GAP序列保守性及Rab-GAP活性分析 | 第35-45页 |
| 1 材料与试剂 | 第35页 |
| 1.1 材料 | 第35页 |
| 1.2 试剂 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-37页 |
| 2.1 不同物种TBC1D15-GAP的序列保守性分析 | 第35页 |
| 2.2 不同物种TBC1D15-GAP的序列进化性分析 | 第35页 |
| 2.3 不同物种TBC1D15-GAP及其突变体和Rab4/5/7/11 的原核表达纯化 | 第35-36页 |
| 2.4 不同物种TBC1D15-GAP及其突变体的Rab-GAP活性分析 | 第36-37页 |
| 3 实验结果 | 第37-44页 |
| 3.1 不同物种TBC1D15-GAP的氨基酸序列保守性 | 第37-38页 |
| 3.2 不同物种TBC1D15及TBC1D15-GAP氨基酸序列的进化性分析结果 | 第38页 |
| 3.3 不同物种TBC1D15-GAP及其突变体和Rab蛋白纯化结果 | 第38-42页 |
| 3.4 Shark/Sus/Homo-TBC1D15-GAP及其突变体的Rab-GAP活性分析结果 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 第五章 不同物种TBC1D15-GAP及其突变体Rab-GAP特异性分析 | 第45-53页 |
| 1 材料与试剂 | 第45页 |
| 1.1 材料 | 第45页 |
| 1.2 试剂 | 第45页 |
| 2 实验方法 | 第45-47页 |
| 2.1 磷含量标准曲线的制作 | 第45-46页 |
| 2.2 Shark/Sus/Homo-TBC1D15-GAP及Rab4/5/7/11 原核表达和大量纯化 | 第46页 |
| 2.3 Shark/Sus/Homo-TBC1D15-GAP及其突变体的Rab-GAP特异性分析 | 第46-47页 |
| 3 实验结果 | 第47-52页 |
| 3.1 磷含量标准曲线 | 第47-48页 |
| 3.2 Shark/Sus/Homo-TBC1D15-GAP及Rab4/5/7/11 原核表达和大量纯化 | 第48-50页 |
| 3.3 不同物种TBC1D15-GAP及其突变体的Rab-GAP特异性分析结果 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 第六章 不同物种TBC1D15-GAP及其突变体蛋白空间结构预测 | 第53-66页 |
| 1 材料 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53-55页 |
| 2.1 Shark/Sus/Homo-TBC1D15-GAP及其突变体空间结构同源预测 | 第53页 |
| 2.2 Shark/Sus/Homo-TBC1D15-GAP及其突变体空间结构比较 | 第53-54页 |
| 2.3 Shark-TBC1D15-GAP与Homo-TBC1D15-GAP空间结构比较 | 第54页 |
| 2.4 Sus-TBC1D15-GAP与Homo-TBC1D15-GAP空间结构比较 | 第54页 |
| 2.5 Shark-TBC1D15-GAP-mutation与Homo-TBC1D15-GAP空间结构比较 | 第54页 |
| 2.6 Shark-TBC1D15-GAP与Homo-TBC1D15-GAP-mutation空间结构比较 | 第54-55页 |
| 3 结果 | 第55-65页 |
| 3.1 Shark/Sus/Homo-TBC1D15-GAP及其突变体蛋白同源预测结构 | 第55-58页 |
| 3.2 Shark/Sus/Homo-TBC1D15-GAP及其突变体空间结构比对结果 | 第58-61页 |
| 3.3 Shark-TBC1D15-GAP与Homo-TBC1D15-GAP空间结构比对结果 | 第61-62页 |
| 3.4 Sus-TBC1D15-GAP与Homo-TBC1D15-GAP空间结构比对结果 | 第62-63页 |
| 3.5 Shark-TBC1D15-GAP-mutation与Homo-TBC1D15-GAP空间结构比对结果 | 第63-64页 |
| 3.6 Shark-TBC1D15-GAP与Homo-TBC1D15-GAP-mutation空间结构比对结果 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
