| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-21页 |
| 1 哺乳动物细胞基因组编辑技术的发展 | 第12-13页 |
| 2 CRISPR-Cas9系统 | 第13-16页 |
| 2.1 CRISPR-Cas系统简介 | 第13-14页 |
| 2.2 CRISPR-Cas9系统的结构和作用机理 | 第14-15页 |
| 2.3 CRISPR-Cas9系统的应用 | 第15-16页 |
| 3 糖尿病的现状及危害 | 第16页 |
| 4 GLUT4囊泡运输 | 第16-17页 |
| 5 Rab蛋白质家族 | 第17-18页 |
| 6 TBC蛋白质家族 | 第18-21页 |
| 6.1 TBC蛋白质家族简介 | 第18页 |
| 6.2 TBC蛋白质家族功能研究进展 | 第18-21页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第21-24页 |
| 1 实验目的、意义 | 第21-22页 |
| 2 实验内容 | 第22-23页 |
| 3 实验流程图 | 第23-24页 |
| 第三章 真核表达载体构建及验证 | 第24-36页 |
| 1 材料与试剂 | 第24-25页 |
| 1.1 材料 | 第24页 |
| 1.2 试剂 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-28页 |
| 2.1 gRNA及其互补引物的设计与构建 | 第25-27页 |
| 2.2 载体酶切 | 第27页 |
| 2.3 引物退火产物和载体质粒酶切产物连接反应 | 第27页 |
| 2.4 CaCl_法制备 E.coliStbl3 感受态细胞 | 第27-28页 |
| 2.5 连接产物的转化 | 第28页 |
| 3 实验结果 | 第28-35页 |
| 3.1 pX462质粒酶切鉴定结果 | 第28-29页 |
| 3.2 重组质粒测序结果 | 第29-35页 |
| 4 讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 基因敲除细胞株的构建 | 第36-43页 |
| 1 材料与试剂 | 第36页 |
| 1.1 细胞株 | 第36页 |
| 1.2 试剂 | 第36页 |
| 1.3 试剂配制 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-40页 |
| 2.1 去内毒素质粒的提取 | 第36-37页 |
| 2.2 He La细胞复苏、传代培养、冻存 | 第37-38页 |
| 2.3 MTT实验 | 第38-39页 |
| 2.4 基因敲除细胞株的构建 | 第39-40页 |
| 3 实验结果 | 第40-42页 |
| 3.1 抗生素Puromycin的MTT实验结果分析 | 第40-41页 |
| 3.2 单克隆细胞株的构建结果及细胞形态学鉴定结果 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 第五章 基因敲除细胞株的鉴定及功能研究 | 第43-65页 |
| 1 材料与试剂 | 第43-46页 |
| 1.1 材料 | 第43页 |
| 1.2 试剂配制 | 第43-46页 |
| 2 方法 | 第46-53页 |
| 2.1 条纹斑竹鲨TBC1D15单克隆抗体的制备 | 第46-48页 |
| 2.2 Western Blotting检测TBC1D15蛋白的表达 | 第48-49页 |
| 2.3 qRT-PCR技术检测TBC1D15基因的转录 | 第49-51页 |
| 2.4 基因组PCR检测TBC1D15基因片段的变化 | 第51-52页 |
| 2.5 流式细胞术检测细胞水平上糖吸收变化 | 第52-53页 |
| 2.6 流式细胞术检测检测细胞周期 | 第53页 |
| 3 实验结果 | 第53-64页 |
| 3.1 TBC1D15单克隆抗体制备结果 | 第53-56页 |
| 3.2 蛋白表达水平上检测TBC1D15的表达 | 第56页 |
| 3.3 转录水平上验证TBC1D15的转录 | 第56-59页 |
| 3.4 基因组PCR结果 | 第59-60页 |
| 3.5 细胞水平上检测糖吸收的变化 | 第60-62页 |
| 3.6 流式细胞仪检测细胞周期的结果 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
