| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 α-苯丙酮酸概述 | 第11-12页 |
| 1.1.1 α-苯丙酮酸的理化性质 | 第11页 |
| 1.1.2 α-苯丙酮酸的应用及制备方法 | 第11-12页 |
| 1.2 L-氨基酸脱氨酶概述 | 第12-15页 |
| 1.2.1 L-氨基酸脱氨酶来源 | 第12-13页 |
| 1.2.2 L-氨基酸脱氨酶分类 | 第13-14页 |
| 1.2.3 L-氨基酸脱氨酶酶学性质 | 第14-15页 |
| 1.3 L-氨基酸脱氨酶结构 | 第15-17页 |
| 1.3.1 L-氨基酸脱氨酶总体结构 | 第15-16页 |
| 1.3.2 L-氨基酸脱氨酶活性位点通道 | 第16-17页 |
| 1.4 L-氨基酸脱氨酶应用 | 第17-18页 |
| 1.5 L-氨基酸脱氨酶的克隆和表达 | 第18页 |
| 1.6 本论文主要研究内容 | 第18-21页 |
| 1.6.1 立题依据及研究意义 | 第18-19页 |
| 1.6.2 主要研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章L-AAD的纯化及酶转化优化 | 第21-31页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 材料与方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 菌株、质粒及试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.2 仪器和设备 | 第22页 |
| 2.2.3 L-AAD在E. coli中的表达 | 第22-23页 |
| 2.2.4 L-AAD溶解及纯化过程优化 | 第23-24页 |
| 2.2.5 L-AAD活性测定及PPA浓度测定 | 第24页 |
| 2.2.6 酶转化PLA合成PPA过程优化 | 第24页 |
| 2.3 结果 | 第24-29页 |
| 2.3.1 重组E. coli构建及诱导条件优化 | 第24-25页 |
| 2.3.2 L-AAD的溶解和纯化过程优化 | 第25-27页 |
| 2.3.3 酶转化优化 | 第27-29页 |
| 2.4 本章小结 | 第29-31页 |
| 第三章 摇瓶两阶段全细胞转化优化及纯酶和全细胞转化的比较 | 第31-39页 |
| 3.1 引言 | 第31页 |
| 3.2 材料与方法 | 第31-32页 |
| 3.2.1 菌株及试剂 | 第31-32页 |
| 3.2.2 生长态细胞转化 | 第32页 |
| 3.2.3 静止态细胞转化优化 | 第32页 |
| 3.2.4 PPA浓度测定 | 第32页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第32-38页 |
| 3.3.1 生长态细胞转化优化 | 第32-34页 |
| 3.3.2 静止态细胞转化优化 | 第34-36页 |
| 3.3.3 两阶段全细胞转化合成PPA | 第36页 |
| 3.3.4 纯酶和全细胞转化的比较 | 第36-38页 |
| 3.4 本章小结 | 第38-39页 |
| 第四章 3 L罐上两阶段全细胞转化优化及静止态细胞转化动力学模型构建 | 第39-48页 |
| 4.1 引言 | 第39页 |
| 4.2 材料与方法 | 第39-40页 |
| 4.2.1 菌株、试剂及培养条件 | 第39页 |
| 4.2.2 3L罐上静止态细胞转化 | 第39页 |
| 4.2.3 溶氧、细胞、底物和产物浓度对反应速率的影响 | 第39-40页 |
| 4.2.4 PPA浓度测定 | 第40页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第40-46页 |
| 4.3.1 生长态细胞转化优化 | 第40页 |
| 4.3.2 静止态细胞转化优化 | 第40-41页 |
| 4.3.3 两阶段全细胞转化合成PPA | 第41页 |
| 4.3.4 溶氧、细胞、底物和产物浓度对反应速率的影响 | 第41-45页 |
| 4.3.5 动力学模型的构建和验证 | 第45-46页 |
| 4.4 本章小结 | 第46-48页 |
| 第五章 PPA降解途径代谢改造及L-AAD分子改造 | 第48-58页 |
| 5.1 引言 | 第48页 |
| 5.2 材料与方法 | 第48-51页 |
| 5.2.1 菌株、质粒、试剂及培养条件 | 第48页 |
| 5.2.2 基因敲除 | 第48-49页 |
| 5.2.3 L-AAD的定向进化 | 第49页 |
| 5.2.4 L-AAD定点突变 | 第49页 |
| 5.2.5 全细胞催化剂的制备 | 第49-50页 |
| 5.2.6 L-AAD及其突变体的纯化 | 第50页 |
| 5.2.7 动力学参数的测定 | 第50-51页 |
| 5.2.8 PPA和PLA浓度测定 | 第51页 |
| 5.3 结果 | 第51-57页 |
| 5.3.1 PPA降解途径的改造 | 第51-53页 |
| 5.3.2 L-AAD的定向进化和定点饱和突变 | 第53-55页 |
| 5.3.3 补料分批转化 | 第55页 |
| 5.3.4 两阶段全细胞转化 | 第55-57页 |
| 5.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 第六章 辅酶合成及再生系统构建 | 第58-70页 |
| 6.1 引言 | 第58页 |
| 6.2 材料与方法 | 第58-61页 |
| 6.2.1 菌株、质粒和试剂 | 第58-60页 |
| 6.2.2 FAD合成和再生基因的表达 | 第60页 |
| 6.2.3 催化剂制备及全细胞转化 | 第60-61页 |
| 6.2.4 PPA浓度测定 | 第61页 |
| 6.3 结果 | 第61-69页 |
| 6.3.1 外加FAD对全细胞转化的影响 | 第61-62页 |
| 6.3.2 FAD合成途径改造 | 第62-65页 |
| 6.3.3 辅酶再生系统的构建 | 第65-68页 |
| 6.3.4 两阶段全细胞转化 | 第68-69页 |
| 6.4 本章小结 | 第69-70页 |
| 主要结论与展望 | 第70-72页 |
| 主要结论 | 第70页 |
| 展望 | 第70-72页 |
| 创新点 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 附录: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第84页 |
