| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-27页 |
| 1.1 前言 | 第10页 |
| 1.2 糖基化修饰概述 | 第10-22页 |
| 1.2.1 蛋白质糖基化的分类 | 第10-14页 |
| 1.2.2 糖蛋白质中糖链的研究策略 | 第14-22页 |
| 1.3 乳腺癌概述 | 第22-23页 |
| 1.4 平分型GlcNAc结构与MGAT3概述 | 第23-25页 |
| 1.5 本课题的立题依据及主要研究内容 | 第25-27页 |
| 1.5.1 立题依据及研究意义 | 第25-26页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 小鼠乳腺上皮细胞在上皮间质转化过程中N-糖链的异常表达 | 第27-48页 |
| 2.1 前言 | 第27-28页 |
| 2.2 材料与方法 | 第28-33页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第28页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.2.3 主要试剂配置 | 第29页 |
| 2.2.4 细胞培养及TGFβ 处理 | 第29页 |
| 2.2.5 细胞复苏 | 第29页 |
| 2.2.6 细胞传代 | 第29页 |
| 2.2.7 细胞冻存 | 第29-30页 |
| 2.2.8 细胞内蛋白质的提取 | 第30页 |
| 2.2.9 Western blot | 第30页 |
| 2.2.10 糖基因芯片解析 | 第30页 |
| 2.2.11 逆转录 | 第30-31页 |
| 2.2.12 实时荧光定量PCR技术 | 第31页 |
| 2.2.13 凝集素芯片解析 | 第31页 |
| 2.2.14 凝集素细胞染色 | 第31页 |
| 2.2.15 N-糖链的释放 | 第31-32页 |
| 2.2.16 N-糖链的衍生化 | 第32页 |
| 2.2.17 N-糖链的除盐 | 第32页 |
| 2.2.18 MALDI-TOF-MS分析N-糖链 | 第32-33页 |
| 2.3 实验结果 | 第33-47页 |
| 2.3.1 小鼠乳腺上皮细胞在EMT过程中N-糖链的质谱分析 | 第33-40页 |
| 2.3.2 小鼠乳腺上皮细胞在EMT过程中糖相关基因的异常变化 | 第40-43页 |
| 2.3.3 凝集素芯片技术解析小鼠乳腺上皮细胞在EMT过程中糖基化变化 | 第43-47页 |
| 2.4 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 乳腺癌发生发展过程中MGAT3及平分型GlcNAc结构的异常变化 | 第48-71页 |
| 3.1 前言 | 第48页 |
| 3.2 材料与方法 | 第48-52页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第48-49页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第49页 |
| 3.2.3 主要试剂配置 | 第49-50页 |
| 3.2.4 细胞培养 | 第50页 |
| 3.2.5 细胞冻存 | 第50页 |
| 3.2.6 细胞内蛋白质的提取 | 第50页 |
| 3.2.7 Western blot | 第50页 |
| 3.2.8 人乳腺癌组织中蛋白质的提取 | 第50-51页 |
| 3.2.9 N-糖链的释放 | 第51页 |
| 3.2.10 N-糖链的除盐 | 第51页 |
| 3.2.11 MALDI-TOF-MS分析N-糖链 | 第51页 |
| 3.2.12 凝集素细胞染色 | 第51页 |
| 3.2.13 细胞免疫荧光 | 第51页 |
| 3.2.14 人乳腺癌组织芯片（Tissue microarray，TMA）凝集素染色 | 第51-52页 |
| 3.2.15 乳腺癌病理切片免疫组化染色 | 第52页 |
| 3.3 实验结果 | 第52-69页 |
| 3.3.1 人源及鼠源乳腺细胞系的糖组学分析 | 第52-57页 |
| 3.3.2 人乳腺癌临床样本的糖组学分析 | 第57-60页 |
| 3.3.3 人乳腺癌组织芯片的凝集素染色检测人乳腺癌组织中平分型GlcNAc结构相对含量 | 第60-64页 |
| 3.3.4 乳腺癌细胞及乳腺癌组织中MGAT3异常表达分析 | 第64-67页 |
| 3.3.5 乳腺癌中DNA甲基化对MGAT3表达的影响 | 第67-69页 |
| 3.3.6 MGAT3的表达与乳腺癌患者生存期的关系 | 第69页 |
| 3.4 本章小结 | 第69-71页 |
| 第四章 平分型GlcNAc糖基化修饰蛋白质的鉴定 | 第71-83页 |
| 4.1 前言 | 第71页 |
| 4.2 材料与方法 | 第71-74页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第71-72页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第72页 |
| 4.2.3 主要试剂配置 | 第72页 |
| 4.2.4 细胞培养 | 第72页 |
| 4.2.5 细胞冻存 | 第72页 |
| 4.2.6 Western blot | 第72-73页 |
| 4.2.7 凝集素细胞染色 | 第73页 |
| 4.2.8 细胞免疫荧光 | 第73页 |
| 4.2.9 细胞内蛋白样品制备 | 第73页 |
| 4.2.10 凝集素富集 | 第73页 |
| 4.2.11 纳升液相色谱-质谱分析 | 第73页 |
| 4.2.12 数据分析 | 第73-74页 |
| 4.3 实验结果 | 第74-82页 |
| 4.3.1 人源乳腺癌细胞中平分型GlcNAc糖基化修饰糖蛋白的鉴定及分析 | 第74-78页 |
| 4.3.2 鼠源乳腺癌细胞中平分型GlcNAc糖基化修饰糖蛋白的鉴定及分析 | 第78-82页 |
| 4.4 本章小结 | 第82-83页 |
| 第五章 基于凝集素辅助的N-糖链的分离、富集方法 | 第83-94页 |
| 5.1 前言 | 第83-84页 |
| 5.2 材料与方法 | 第84-86页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第84-85页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第85页 |
| 5.2.3 主要试剂配置 | 第85页 |
| 5.2.4 细胞培养 | 第85页 |
| 5.2.5 细胞内蛋白质的提取 | 第85页 |
| 5.2.6 N-糖链的释放 | 第85-86页 |
| 5.2.7 N-糖链的除盐 | 第86页 |
| 5.2.8 MALDI-TOF-MS分析N-糖链 | 第86页 |
| 5.3 实验结果 | 第86-93页 |
| 5.3.1 利用凝集素辅助的方法对鸡卵清蛋白中N-糖链进行分离、富集及鉴定 | 第86-88页 |
| 5.3.2 利用凝集素辅助的方法对小鼠乳腺上皮细胞中N-糖链进行分离、富集及鉴定 | 第88-90页 |
| 5.3.3 利用凝集素辅助的方法对人血清中N-糖链进行分离、富集及鉴定 | 第90-93页 |
| 5.4 本章小结 | 第93-94页 |
| 主要结论与展望 | 第94-96页 |
| 论文创新点 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-110页 |
| 附录 1：表格 | 第110-153页 |
| 附录 2：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第153页 |
