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家蚕Apolipoprotein D基因克隆及功能分析

摘要第1-11页
ABSTRACT第11-14页
第一章 文献综述第14-24页
   ·载脂蛋白的研究概况第14页
   ·载脂蛋白的分类与功能第14-15页
   ·昆虫载脂蛋白研究概况第15-16页
   ·载脂蛋白D的概述第16页
   ·载脂蛋白D的结构特征第16-17页
   ·载脂蛋白D的研究现状第17-19页
   ·载脂蛋白D在果蝇等昆虫中的研究进展第19页
   ·载脂蛋白D与脂类物质配体第19-20页
   ·脂类物质激素与家蚕的变态发育第20-24页
第二章 引言第24-26页
   ·研究背景及目的意义第24页
   ·研究内容第24-25页
   ·技术路线第25-26页
第三章 家蚕APODⅠ、APODⅡ的鉴定及生物信息学分析第26-42页
   ·材料和方法第26-29页
     ·实验材料第26页
     ·实验仪器与试剂第26-29页
   ·实验方法第29-32页
     ·双向电泳的样品预处理第29页
     ·等点聚焦电泳第29页
     ·胶条平衡第29页
     ·SDS-PAGE电泳及IPG胶条转移第29-30页
     ·蛋白质染色-银染第30页
     ·银染样品的胶内酶解第30-31页
     ·家蚕载脂蛋白D基因ApoDⅠ、ApoDⅡ的生物信息学分析第31-32页
   ·实验结果第32-39页
     ·家蚕血液及蜕皮液的双向电泳图谱第32-33页
     ·双向电泳差异蛋白点的质谱鉴定第33页
     ·ApoDⅠ和ApoDⅡ基因的生物信息学分析第33-36页
     ·载脂蛋白D基因(ApoDⅠ和ApoDⅡ)多序列比对与进化关系的分析第36-37页
     ·家蚕lipocalin家族表达芯片分析第37-39页
   ·讨论第39-42页
第四章 家蚕载脂蛋白D基因APODⅠ,APODⅡ的原核表达、纯化和抗体制备第42-64页
   ·材料与方法第42-48页
       ·实验材料第42页
     ·实验仪器与试剂第42-43页
     ·主要试剂第43-44页
     ·主要溶液配制第44-48页
   ·实验方法第48-56页
     ·ApoDⅠ, ApoDⅡ基因的引物设计第48页
     ·RNA的提取及cDNA的制备第48-50页
     ·重组载体的构建第50-53页
     ·原核表达及检测第53-54页
     ·大量重组蛋白的表达与纯化第54-56页
     ·多克隆抗体的制备第56页
   ·实验结果第56-62页
     ·家蚕载脂蛋白D基因的原核表达载体构建第56-57页
     ·家蚕载脂蛋白D基因的原核表达检测第57-58页
     ·ApoDⅡ重组蛋白的纯化第58页
     ·ApoDⅡ的MALDI-TOF/TOF质谱鉴定第58-59页
     ·ApoDⅡ多克隆抗体制备及特异性检测第59-60页
     ·可溶性的家蚕载脂蛋白D的原核表达载体构建第60-61页
     ·可溶性的家蚕载脂蛋白D的原核表达检测第61页
     ·可溶性重组蛋白ApoDⅡ的纯化第61-62页
   ·讨论第62-64页
第五章 家蚕APODⅠ、APODⅡ的表达特征分析及组织定位第64-76页
   ·实验材料与仪器试剂第64-66页
     ·实验材料第64页
     ·主要仪器第64-65页
     ·主要试剂第65页
     ·主要溶液配制第65-66页
   ·试验方法第66-69页
     ·RNA的提取及cDNA的制备第66-67页
     ·RT-PCR和Q-PCR检测第67-68页
     ·家蚕蛋白样品的制备及Western Blot分析第68-69页
     ·免疫荧光定位第69页
   ·实验结果第69-75页
     ·家蚕载脂蛋白D基因在组织水平上的表达特征第69-71页
     ·家蚕ApoDⅡ在5龄 3 天家蚕各组织蛋白水平表达检测第71页
     ·家蚕ApoDⅡ在各组织各时期的蛋白水平表达情况第71-72页
     ·家蚕ApoDⅡ的免疫荧光定位第72-75页
   ·讨论第75-76页
第六章 家蚕APOD的功能分析及调控初探第76-84页
   ·实验材料与实验试剂第76-77页
     ·实验材料第76页
     ·实验仪器第76页
     ·实验试剂与溶液配制第76-77页
   ·实验方法第77-78页
     ·紫外线和过氧化氢处理家蚕个体的实验第77页
     ·细菌侵染家蚕个体实验第77-78页
     ·蜕皮激素添加BmE细胞第78页
     ·家蚕ApoDⅡ基因启动子预测第78页
   ·实验结果第78-80页
     ·家蚕个体在氧化应激压力下ApoDⅠ和ApoDⅡ基因的表达变化第78页
     ·家蚕个体在细菌侵染后ApoDⅠ和Apo DⅡ基因的表达变化第78-80页
     ·蜕皮激素在细胞水平诱导家蚕BmE细胞第80页
     ·家蚕ApoDⅡ基因启动子序列转录因子结合点预测第80页
   ·讨论第80-84页
第七章 综合与讨论第84-86页
   ·家蚕血液和蜕皮液的蛋白质组学及生物信息学分析第84页
   ·ApoDⅠ和ApoDⅡ原核表达、纯化及抗体制备第84-85页
   ·ApoDⅠ和ApoDⅡ的表达特征及组织定位第85页
   ·家蚕BmApoD的功能分析及调控初探第85-86页
参考文献第86-90页
硕士在读期间发表文章及参研课题第90-92页
致谢第92页

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