摘要 | 第1-11页 |
ABSTRACT | 第11-14页 |
第一章 文献综述 | 第14-24页 |
·载脂蛋白的研究概况 | 第14页 |
·载脂蛋白的分类与功能 | 第14-15页 |
·昆虫载脂蛋白研究概况 | 第15-16页 |
·载脂蛋白D的概述 | 第16页 |
·载脂蛋白D的结构特征 | 第16-17页 |
·载脂蛋白D的研究现状 | 第17-19页 |
·载脂蛋白D在果蝇等昆虫中的研究进展 | 第19页 |
·载脂蛋白D与脂类物质配体 | 第19-20页 |
·脂类物质激素与家蚕的变态发育 | 第20-24页 |
第二章 引言 | 第24-26页 |
·研究背景及目的意义 | 第24页 |
·研究内容 | 第24-25页 |
·技术路线 | 第25-26页 |
第三章 家蚕APODⅠ、APODⅡ的鉴定及生物信息学分析 | 第26-42页 |
·材料和方法 | 第26-29页 |
·实验材料 | 第26页 |
·实验仪器与试剂 | 第26-29页 |
·实验方法 | 第29-32页 |
·双向电泳的样品预处理 | 第29页 |
·等点聚焦电泳 | 第29页 |
·胶条平衡 | 第29页 |
·SDS-PAGE电泳及IPG胶条转移 | 第29-30页 |
·蛋白质染色-银染 | 第30页 |
·银染样品的胶内酶解 | 第30-31页 |
·家蚕载脂蛋白D基因ApoDⅠ、ApoDⅡ的生物信息学分析 | 第31-32页 |
·实验结果 | 第32-39页 |
·家蚕血液及蜕皮液的双向电泳图谱 | 第32-33页 |
·双向电泳差异蛋白点的质谱鉴定 | 第33页 |
·ApoDⅠ和ApoDⅡ基因的生物信息学分析 | 第33-36页 |
·载脂蛋白D基因(ApoDⅠ和ApoDⅡ)多序列比对与进化关系的分析 | 第36-37页 |
·家蚕lipocalin家族表达芯片分析 | 第37-39页 |
·讨论 | 第39-42页 |
第四章 家蚕载脂蛋白D基因APODⅠ,APODⅡ的原核表达、纯化和抗体制备 | 第42-64页 |
·材料与方法 | 第42-48页 |
·实验材料 | 第42页 |
·实验仪器与试剂 | 第42-43页 |
·主要试剂 | 第43-44页 |
·主要溶液配制 | 第44-48页 |
·实验方法 | 第48-56页 |
·ApoDⅠ, ApoDⅡ基因的引物设计 | 第48页 |
·RNA的提取及cDNA的制备 | 第48-50页 |
·重组载体的构建 | 第50-53页 |
·原核表达及检测 | 第53-54页 |
·大量重组蛋白的表达与纯化 | 第54-56页 |
·多克隆抗体的制备 | 第56页 |
·实验结果 | 第56-62页 |
·家蚕载脂蛋白D基因的原核表达载体构建 | 第56-57页 |
·家蚕载脂蛋白D基因的原核表达检测 | 第57-58页 |
·ApoDⅡ重组蛋白的纯化 | 第58页 |
·ApoDⅡ的MALDI-TOF/TOF质谱鉴定 | 第58-59页 |
·ApoDⅡ多克隆抗体制备及特异性检测 | 第59-60页 |
·可溶性的家蚕载脂蛋白D的原核表达载体构建 | 第60-61页 |
·可溶性的家蚕载脂蛋白D的原核表达检测 | 第61页 |
·可溶性重组蛋白ApoDⅡ的纯化 | 第61-62页 |
·讨论 | 第62-64页 |
第五章 家蚕APODⅠ、APODⅡ的表达特征分析及组织定位 | 第64-76页 |
·实验材料与仪器试剂 | 第64-66页 |
·实验材料 | 第64页 |
·主要仪器 | 第64-65页 |
·主要试剂 | 第65页 |
·主要溶液配制 | 第65-66页 |
·试验方法 | 第66-69页 |
·RNA的提取及cDNA的制备 | 第66-67页 |
·RT-PCR和Q-PCR检测 | 第67-68页 |
·家蚕蛋白样品的制备及Western Blot分析 | 第68-69页 |
·免疫荧光定位 | 第69页 |
·实验结果 | 第69-75页 |
·家蚕载脂蛋白D基因在组织水平上的表达特征 | 第69-71页 |
·家蚕ApoDⅡ在5龄 3 天家蚕各组织蛋白水平表达检测 | 第71页 |
·家蚕ApoDⅡ在各组织各时期的蛋白水平表达情况 | 第71-72页 |
·家蚕ApoDⅡ的免疫荧光定位 | 第72-75页 |
·讨论 | 第75-76页 |
第六章 家蚕APOD的功能分析及调控初探 | 第76-84页 |
·实验材料与实验试剂 | 第76-77页 |
·实验材料 | 第76页 |
·实验仪器 | 第76页 |
·实验试剂与溶液配制 | 第76-77页 |
·实验方法 | 第77-78页 |
·紫外线和过氧化氢处理家蚕个体的实验 | 第77页 |
·细菌侵染家蚕个体实验 | 第77-78页 |
·蜕皮激素添加BmE细胞 | 第78页 |
·家蚕ApoDⅡ基因启动子预测 | 第78页 |
·实验结果 | 第78-80页 |
·家蚕个体在氧化应激压力下ApoDⅠ和ApoDⅡ基因的表达变化 | 第78页 |
·家蚕个体在细菌侵染后ApoDⅠ和Apo DⅡ基因的表达变化 | 第78-80页 |
·蜕皮激素在细胞水平诱导家蚕BmE细胞 | 第80页 |
·家蚕ApoDⅡ基因启动子序列转录因子结合点预测 | 第80页 |
·讨论 | 第80-84页 |
第七章 综合与讨论 | 第84-86页 |
·家蚕血液和蜕皮液的蛋白质组学及生物信息学分析 | 第84页 |
·ApoDⅠ和ApoDⅡ原核表达、纯化及抗体制备 | 第84-85页 |
·ApoDⅠ和ApoDⅡ的表达特征及组织定位 | 第85页 |
·家蚕BmApoD的功能分析及调控初探 | 第85-86页 |
参考文献 | 第86-90页 |
硕士在读期间发表文章及参研课题 | 第90-92页 |
致谢 | 第92页 |