| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 第一章 综述 | 第13-29页 |
| 1 糖尿病皮肤伤口炎症反应 | 第13-17页 |
| ·糖尿病皮肤伤口愈合 | 第13-15页 |
| ·糖尿病伤口炎症反应 | 第15-17页 |
| 2 白介素33(IL-33)在糖尿病炎症应答中的生物学功能 | 第17-21页 |
| ·IL-33及受体ST2 | 第17-18页 |
| ·IL-33调节炎症应答的作用机理 | 第18-20页 |
| ·糖尿病中IL-33的表达调节 | 第20-21页 |
| 3 microRNA在糖尿病炎症应答中的生物学功能 | 第21-26页 |
| ·microRNA的加工成熟过程 | 第21-22页 |
| ·microRNA的靶基因预测 | 第22-23页 |
| ·microRNA的表达调节 | 第23页 |
| ·microRNA对靶基因表达调控的机制 | 第23-24页 |
| ·microRNA在糖尿病炎症应答中的功能 | 第24-26页 |
| 4 酪氨酸磷酸酶SHP-1在糖尿病炎症应答中的生物学功能 | 第26-29页 |
| ·酪氨酸磷酸酶SHP-1 | 第26页 |
| ·SHP-1调节炎症应答的机制 | 第26-27页 |
| ·糖尿病中SHP-1的调节表达 | 第27-29页 |
| 第二章 高糖诱导miR-9抑制IL-33表达的功能机制 | 第29-74页 |
| 一 引言 | 第29-30页 |
| 二 实验材料 | 第30-35页 |
| 1 细胞、菌株及质粒 | 第30-31页 |
| 2 实验试剂 | 第31-32页 |
| ·分子生物学实验试剂 | 第31页 |
| ·细胞培养试剂 | 第31-32页 |
| ·细菌培养试剂 | 第32页 |
| ·其他细胞实验试剂 | 第32页 |
| 3 实验仪器与耗材 | 第32页 |
| 4 引物 | 第32-35页 |
| ·实时荧光定量PCR引物序列 | 第32-33页 |
| ·克隆引物序列 | 第33-35页 |
| 5 抗体 | 第35页 |
| 三 实验方法 | 第35-46页 |
| 1 细胞培养 | 第35-36页 |
| ·HEK、HaCaT和HEK-293T/17复苏 | 第35-36页 |
| ·HEK、HaCaT和HEK-293T/17传代 | 第36页 |
| ·HEK、HaCaT和HEK-293T/17冻存 | 第36页 |
| 2 细菌培养 | 第36页 |
| ·LB培养基配制 | 第36页 |
| ·大肠杆菌DH5α培养 | 第36页 |
| 3 总RNA提取、反转录和实时定量PCR | 第36-38页 |
| ·总RNA提取 | 第36-37页 |
| ·RNA反转录 | 第37-38页 |
| ·实时定量PCR | 第38页 |
| 4 蛋白质提取、样品制备和免疫印迹(western blot) | 第38-42页 |
| ·蛋白质提取和样品制备 | 第38-39页 |
| ·蛋白质免疫印迹 | 第39-42页 |
| 5 蛋白免疫共沉淀(Co-IP) | 第42页 |
| 6 定点突变或缺失质粒构建 | 第42-43页 |
| 7 细胞转染 | 第43-44页 |
| ·脂质体Lipofectamine2000转染 | 第43页 |
| ·脂质体PEI转染 | 第43-44页 |
| ·磷酸钙沉淀转染 | 第44页 |
| 8 microRNA的检测与克隆 | 第44-45页 |
| ·microRNA的检测 | 第44-45页 |
| ·microRNA的克隆 | 第45页 |
| 9 双荧光素酶报告实验 | 第45页 |
| 10 实验数据统计分析 | 第45-46页 |
| 四 实验结果与分析 | 第46-72页 |
| 1 糖尿病小鼠皮肤伤口IL-33低表达 | 第46-47页 |
| 2 糖尿病小鼠皮肤伤口炎症因子高表达 | 第47-48页 |
| 3 高糖促进TLR3依赖的炎症因子的表达 | 第48-49页 |
| 4 IL-33抑制TLR3依赖的炎症因子的表达 | 第49-51页 |
| 5 高糖抑制poly(I：C)或IL-17诱导的IL-33的表达 | 第51-53页 |
| 6 高糖通过激活NF-κB诱导miR-9抑制IL-33的表达 | 第53-64页 |
| ·高糖抑制IL-33 mRNA的表达 | 第53-54页 |
| ·高糖诱导miR-9的表达 | 第54-56页 |
| ·高糖诱导miR-9靶向IL-33 mRNA 3'UTR抑制IL-33的表达 | 第56-60页 |
| ·高糖不调节葡萄糖转运蛋白GLUT1/4和Dicer酶的表达 | 第60-61页 |
| ·高糖不诱导转录因子C/EBPα/β、VDR和GATA-1的表达 | 第61-62页 |
| ·高糖通过激活NF-κB诱导miR-9的表达 | 第62-64页 |
| 7 IL-33诱导SHP-1表达抑制poly(I：C)诱导的JNK2的磷酸化 | 第64-72页 |
| ·IL-33抑制poly(I：C)诱导的JNK2的磷酸化 | 第64-65页 |
| ·IL-33诱导负调节子SHP-1的表达 | 第65-66页 |
| ·SHP-1与JNK相互结合 | 第66-67页 |
| ·JNK2与SHP-1磷酸酶活性位点结合 | 第67-69页 |
| ·SHP-1与JNK2磷酸化位点结合 | 第69-72页 |
| 五 讨论 | 第72-74页 |
| 第三章 总结 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-86页 |
| 附录 | 第86-87页 |
| 硕士期间研究成果 | 第87页 |
