| 摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-37页 |
| ·DNA损伤 | 第15-22页 |
| ·DNA分子的自发性损伤 | 第15-19页 |
| ·物理因素引起的DNA损伤 | 第19-21页 |
| ·化学因素引起的DNA损伤 | 第21-22页 |
| ·DNA修复 | 第22-25页 |
| ·切除修复 | 第22-24页 |
| ·错配修复 | 第24-25页 |
| ·交联修复 | 第25页 |
| ·双键断裂修复 | 第25页 |
| ·偶联修复 | 第25页 |
| ·复制后修复 | 第25页 |
| ·SOS系统 | 第25页 |
| ·参与BER修复的酶 | 第25-33页 |
| ·DNA糖苷酶 | 第25-28页 |
| ·AP内切核酸酶 | 第28页 |
| ·DNA聚合酶 | 第28-32页 |
| ·加工酶 | 第32页 |
| ·DNA连接酶 | 第32-33页 |
| ·极端微生物 | 第33-35页 |
| ·硫化叶菌 | 第34-35页 |
| ·本课题的立题依据及研究内容 | 第35-37页 |
| 第二章 硫磺硫化叶菌Sulfolobus acidocaldarius的两种DNA糖苷酶UDGIV和UDGV基因克隆和表达载体的构建 | 第37-45页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·菌株和质粒 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-38页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第38页 |
| ·方法与步骤 | 第38-43页 |
| ·菌种活化以及培养 | 第38页 |
| ·S. acidocaldarius基因组抽提 | 第38-39页 |
| ·质粒的小量提取 | 第39页 |
| ·S. acidocaldarius基因克隆 | 第39-43页 |
| ·PCR扩增片段 | 第39-41页 |
| ·酶切反应 | 第41页 |
| ·连接反应 | 第41-42页 |
| ·质粒转化 | 第42页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-44页 |
| ·表达载体p ET28-udg IV与p ET28- udg V的构建 | 第43-44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 第三章 硫磺矿硫化叶菌Sulfolobus acidocaldarius的两种DNA糖苷酶UDGIV和UDGV重组蛋白表达纯化 | 第45-54页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第45页 |
| ·方法与步骤 | 第45-50页 |
| ·硫化叶菌UDG重组蛋白BL21(DE3)p Lyss中诱导表达 | 第45-46页 |
| ·硫化叶菌尿嘧啶DNA糖苷酶的镍离子亲和纯化 | 第46-47页 |
| ·SDS聚丙烯酸胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第47-48页 |
| ·Brandford法测定蛋白浓度 | 第48-49页 |
| ·BSA标准曲线的绘制 | 第48页 |
| ·硫化叶菌尿嘧啶DNA糖苷酶UDGIV和UDGV蛋白浓度测定 | 第48-49页 |
| ·硫化叶菌尿嘧啶DNA糖苷酶的酶学性质测定 | 第49-50页 |
| ·硫化叶菌尿嘧啶DNA糖苷酶的酶学性质测定底物准备 | 第49页 |
| ·硫化叶菌尿嘧啶DNA糖苷酶活性测定方法 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-53页 |
| ·UDGIV和UDGV重组蛋白诱导纯化 | 第50页 |
| ·硫化叶菌尿嘧啶DNA糖苷酶UDGIV和UDGV蛋白浓度测定 | 第50-52页 |
| ·BSA标准曲线的绘制 | 第51页 |
| ·硫化叶菌尿嘧啶DNA糖苷酶UDGIV和UDGV蛋白浓度测定 | 第51-52页 |
| ·硫化叶菌尿嘧啶DNA糖苷酶活性初步测定 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 UDGIV和UDGV DNA糖苷酶活性测定 | 第54-72页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第54页 |
| ·方法与步骤 | 第54-60页 |
| ·S. acidocaldarius两种UDG糖苷酶反应条件优化 | 第54-56页 |
| ·S. acidocaldarius两种UDG糖苷酶的酶学特性 | 第56-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-71页 |
| ·S. acidocaldarius两种UDG糖苷酶反应条件优化 | 第60-65页 |
| ·S. acidocaldarius两种UDG糖苷酶生化特性 | 第65-71页 |
| ·本章小结 | 第71-72页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第72-76页 |
| ·全文总结 | 第72-75页 |
| ·工作展望 | 第75-76页 |
| 第六章 参考文献 | 第76-87页 |
| 第七章 附录 | 第87-92页 |
| ·培养基及试剂制备 | 第87-89页 |
| ·本文所用常规室验技术 | 第89-92页 |
| ·DNA水平电泳 | 第89页 |
| ·蛋白质透析 | 第89-90页 |
| ·Ni-NTA树脂再生和制备 | 第90页 |
| ·抗生素储备液及使用浓度 | 第90页 |
| ·常用缓冲液配方 | 第90-92页 |
| 第八章 致谢 | 第92-93页 |
| 在学校期间发表论文 | 第93页 |
