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三个小麦脱水素基因的克隆和表达

致谢第1-8页
摘要第8-10页
1 文献综述第10-20页
   ·干旱胁迫信号的传导及基因表达调控网络第10-11页
     ·干旱胁迫信号的传导途径第10-11页
     ·干旱胁迫诱导的基因表达调控网络第11页
   ·干旱胁迫诱导的功能基因及其在作物抗旱分子育种方面的应用第11-13页
     ·参与渗透调节的基因第12页
     ·提高植物抗氧化能力的相关基因第12-13页
     ·与抗旱相关的膜蛋白基因第13页
   ·植物胚胎后期丰富蛋白(LEA)及其功能第13-15页
     ·LEA 蛋白的性质第13页
     ·LEA 基因的表达与调控第13-14页
     ·LEA 蛋白的分类与功能第14-15页
   ·植物脱水素及其功能第15-20页
     ·脱水素的结构及分类第15-16页
     ·脱水素基因的表达与调控第16-17页
     ·脱水素的亚细胞定位第17页
     ·脱水素的功能与作用机理第17-20页
       ·稳定细胞膜第17-18页
       ·清除自由基第18页
       ·结合金属离子第18页
       ·分子伴侣作用第18-19页
       ·脱水素与植物抗逆性第19-20页
2 引言第20页
3 材料与方法第20-32页
   ·实验材料第20-22页
     ·植物材料和菌株第20-21页
     ·质粒载体第21页
     ·工具酶及试剂盒第21页
     ·主要仪器第21页
     ·PCR 引物第21-22页
     ·LB 培养基第22页
   ·实验方法第22-25页
     ·总 RNA 提取、质量鉴定及纯化第22-24页
       ·试验前的准备第22页
       ·总 RNA 提取操作步骤(Trizol 法)第22-23页
       ·总 RNA 质量及浓度测定第23页
       ·总 RNA 的纯化第23-24页
     ·目的基因的克隆第24-25页
       ·反转录:cDNA 第一链的合成第24页
       ·克隆基因表达特性分析第24-25页
   ·原核表达第25-28页
     ·原核表达载体的构建第25-26页
       ·目的蛋自完整 ORF 引物设计第25页
       ·带酶切位点的 PCR 回收产物和原核表达载体 pET-28a 质粒的双酶切第25页
       ·基因片段与原核表达载体 pET-28a 连接反应第25-26页
       ·重组子的鉴定和转化第26页
     ·目的蛋白的诱导表达第26页
     ·SDS 一 PAGE 检测表达产物第26-28页
     ·考马斯亮蓝 G-250 法进行蛋白浓度的测定第28页
   ·Western blot 鉴定目的蛋白的免疫原性第28-31页
   ·α-淀粉酶活性测定第31-32页
4 结果与分析第32-57页
   ·小麦脱水素基因的克隆及其特征分析第32-44页
     ·总 RNA 的提取及 cDNA 的获得第32页
     ·小麦脱水素基因的克隆及序列分析第32-44页
       ·小麦脱水素基因 TaDHN-1 的克隆和序列分析第33-34页
       ·小麦脱水素基因 TaDHN-2 的克隆及序列分析第34-36页
       ·小麦脱水素基因 TaDHN-3 的克隆和序列分析第36-39页
       ·小麦脱水素基因 TaDHN-1 编码蛋白的结构特性分析第39-41页
       ·小麦脱水素基因 TaDHN-2 编码蛋白的结构特性分析第41-43页
       ·小麦脱水素基因 TaDHN-3 编码蛋白的结构特性分析第43-44页
   ·小麦脱水素基因对非生物胁迫的响应第44-55页
     ·在植物激素 ABA 处理过程中脱水素基因的表达模式第44-46页
     ·渗透胁迫过程中脱水素基因的表达模式第46-50页
     ·温度胁迫对脱水素基因的表达的影响第50-54页
     ·种子成熟过程中脱水素基因的表达模式第54-55页
   ·小麦脱水素对酶活性的保护功能分析第55-57页
     ·融合蛋白 HIS-TaDHN-2 的表达和纯化第55-56页
     ·融合蛋白 HIS-TaDHN-2 对 a-淀粉酶酶活性的影响第56-57页
5 讨论第57-60页
   ·小麦脱水素基因的结构特性及其脱水保护功能第57-58页
   ·小麦脱水素基因对非生物胁迫的响应及其功能探讨第58-59页
   ·小麦种子发育过程中脱水素基因的表达模式及其脱水保护功能分析第59-60页
参考文献第60-67页
Abstract第67-69页

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