| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-19页 |
| ·研究背景 | 第10页 |
| ·植物蔗糖转运蛋白 | 第10-15页 |
| ·蔗糖的转运 | 第10-11页 |
| ·植物蔗糖转运蛋白的存在 | 第11-13页 |
| ·植物蔗糖转运蛋白 | 第11-12页 |
| ·SUTs 的研究进展 | 第12-13页 |
| ·蔗糖转运蛋白的结构、分类和进化 | 第13-15页 |
| ·蔗糖转运蛋白的结构特征 | 第13-14页 |
| ·蔗糖转运蛋白的分类 | 第14页 |
| ·蔗糖转运蛋白的进化 | 第14-15页 |
| ·基因表达的定量分析方法 | 第15-16页 |
| ·RNA 印迹 | 第15页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第15-16页 |
| ·核糖核酸酶保护分析 | 第16页 |
| ·蛋白质印迹 | 第16页 |
| ·定量分析中内参基因的选用 | 第16-17页 |
| ·植物的抗逆性 | 第17页 |
| ·植物中糖转运蛋白的生物学功能 | 第17-18页 |
| ·研究植物基因功能的策略和方法 | 第18页 |
| ·研究策略 | 第18页 |
| ·研究方法 | 第18页 |
| ·过量表达 | 第18页 |
| ·RNAi 干扰 | 第18页 |
| ·酵母双杂交技术 | 第18页 |
| ·农杆菌介导转化的特点 | 第18-19页 |
| 2 引言 | 第19-20页 |
| ·PpSUT2 基因的克隆 | 第19页 |
| ·PpSUT2 基因的功能研究 | 第19-20页 |
| 3 材料与方法 | 第20-32页 |
| ·试验材料 | 第20页 |
| ·供试材料 | 第20页 |
| ·酶及主要试剂 | 第20页 |
| ·菌株与载体 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| ·试验方法 | 第20-32页 |
| ·总 RNA 的提取及 cDNA 第一链的合成 | 第20-21页 |
| ·桃不同组织总 RNA 的提取 | 第20-21页 |
| ·总 RNA 检测及浓度测定 | 第21页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第21页 |
| ·内参引物选择及反转录质量检测 | 第21页 |
| ·PpSUT2 基因克隆 | 第21-23页 |
| ·PpSUT2 片段的扩增 | 第21-22页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第22页 |
| ·回收产物与测序载体的连接 | 第22页 |
| ·重组质粒的转化 | 第22页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第22-23页 |
| ·PpSUT2 序列分析 | 第23页 |
| ·PpSUT2 组织/器官特异性表达 | 第23-24页 |
| ·遗传转化载体的构建 | 第24-25页 |
| ·表达载体的构建 | 第24-25页 |
| ·表达载体导入根癌农杆菌 | 第25页 |
| ·农杆菌介导的水稻愈伤组织的遗传转化 | 第25-28页 |
| ·水稻基本培养基的配制 | 第26页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第26页 |
| ·农杆菌的培养 | 第26-27页 |
| ·农杆菌介导水稻转化 | 第27页 |
| ·转基因水稻植株的初步鉴定 | 第27-28页 |
| ·农杆菌介导烟草的遗传转化 | 第28-30页 |
| ·烟草培养基 | 第28-29页 |
| ·农杆菌介导的烟草的遗传转化 | 第29-30页 |
| ·转基因烟草植株的初步鉴定 | 第30页 |
| ·转基因烟草离体条件下失水速率测定 | 第30页 |
| ·转基因烟草植株的抗逆性实验 | 第30-32页 |
| ·转基因烟草的低温胁迫处理 | 第30页 |
| ·转基因烟草干旱胁迫处理 | 第30页 |
| ·转基因烟草胁迫条件下相应生理指标的测定 | 第30-32页 |
| ·桃 PpSUT2 的原核表达 | 第32页 |
| ·原核表达载体构建 | 第32页 |
| ·MBP 融合蛋白的表达和 PAGE 分析 | 第32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-55页 |
| ·桃不同组织总 RNA 提取 | 第32-33页 |
| ·内参引物的选择及反转录质量检测 | 第33-34页 |
| ·可能的蔗糖转运蛋白基因 PpSUT2 的获得和序列分析 | 第34-36页 |
| ·PpSUT2 同源性分析 | 第36-39页 |
| ·PpSUT2 编码氨基酸的跨膜结构分析及系统进化树分析 | 第39-40页 |
| ·PpSUT2 组织/器官特异性表达 | 第40-42页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·转 PpSUT2 水稻的获得 | 第43-45页 |
| ·转 PpSUT2 基因水稻获得 | 第43页 |
| ·成熟胚性愈伤的诱导 | 第43页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选及植株再生 | 第43-44页 |
| ·转基因水稻的 PCR 鉴定 | 第44-45页 |
| ·转 PpSUT2 烟草获得及抗逆性分析 | 第45-52页 |
| ·转 PpSUT2 基因烟草的获得 | 第45-46页 |
| ·转基因烟草植株的 PCR 鉴定 | 第46页 |
| ·PpSUT2 转基因烟草苗期失水速率测定 | 第46-47页 |
| ·转 PpSUT2 基因烟草对低温胁迫的抗性 | 第47-50页 |
| ·低温处理对烟草叶片相对电导率的影响 | 第48页 |
| ·低温处理对烟草叶片 MDA 含量的影响 | 第48-49页 |
| ·低温处理对烟草叶片 Pro 和可溶性糖含量的影响 | 第49-50页 |
| ·PpSUT2 基因过表达增强了烟草在干旱胁迫下的抗逆能力 | 第50-52页 |
| ·干旱胁迫对烟草叶片相对电导率的影响 | 第51页 |
| ·干旱胁迫对烟草叶片 MDA 含量的影响 | 第51-52页 |
| ·干旱胁迫对烟草叶片脯氨酸和可溶性糖含量的影响 | 第52页 |
| ·PpSUT2 基因的原核表达 | 第52-55页 |
| ·原核表达载体构建 | 第52-53页 |
| ·pMALc2x-PpSUT2f4 原核表达载体构建 | 第52-53页 |
| ·pMALc2x-PpSUT2F 原核表达载体构建 | 第53页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第53-55页 |
| 5 讨论与结论 | 第55-58页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·PpSUT2 的结构分析 | 第55页 |
| ·PpSUT2 表达的组织/器官差异性 | 第55-56页 |
| ·过表达 PpSUT2 提高了烟草对低温和干旱逆境的抗性 | 第56-57页 |
| ·结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| Abstract | 第66-68页 |
