牛副流感病毒3型血清学调查及其单克隆抗体的制备与应用
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 英文缩略表 | 第15-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-24页 |
| ·牛副流感病毒3型的形态特征 | 第16页 |
| ·牛副流感病毒3型的基因组 | 第16-19页 |
| ·NP蛋白 | 第17页 |
| ·P蛋白 | 第17-18页 |
| ·M蛋白 | 第18页 |
| ·F蛋白 | 第18页 |
| ·HN蛋白 | 第18页 |
| ·L蛋白 | 第18-19页 |
| ·牛副流感病毒3型的流行病学特点 | 第19页 |
| ·临床症状和病理变化 | 第19-20页 |
| ·牛副流感病毒3型的鉴定 | 第20-21页 |
| ·病毒的分离 | 第20页 |
| ·血清中和实验 | 第20页 |
| ·血凝抑制实验 | 第20-21页 |
| ·免疫荧光实验 | 第21页 |
| ·分子生物学方法 | 第21页 |
| ·抗牛副流感病毒3型单抗研究进展 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 我国12省份BPIV3血清学调查 | 第24-30页 |
| 摘要 | 第24页 |
| ·材料和方法 | 第24-26页 |
| ·临床血清样品及处理 | 第24页 |
| ·细胞和病毒 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·仪器和材料 | 第24页 |
| ·样品处理 | 第24-25页 |
| ·病毒的培养和TCID50的测定 | 第25页 |
| ·BPIV3病毒的稀释 | 第25页 |
| ·MDBK细胞的准备和接种 | 第25页 |
| ·回归滴定确定稀释后病毒毒价 | 第25-26页 |
| ·结果的观察和判断 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-28页 |
| ·BPIV3接种MDBK细胞 | 第26-27页 |
| ·12省份BPIV3血清学调查结果 | 第27页 |
| ·我国区域性BPIV3的感染情况 | 第27-28页 |
| ·讨论 | 第28-30页 |
| ·我国BPIV3省区分布性差异分析 | 第28页 |
| ·我国BPIV3区域性分布差异分析 | 第28-30页 |
| 第三章 抗BPIV3单克隆抗体的制备与鉴定 | 第30-41页 |
| 摘要 | 第30页 |
| ·材料与方法 | 第30-36页 |
| ·病毒株、细胞及实验动物 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·仪器设备 | 第30页 |
| ·病毒的纯化 | 第30-31页 |
| ·小鼠免疫 | 第31页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第31-32页 |
| ·细胞融合 | 第32-33页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第33-34页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化 | 第34页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第34-35页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第35页 |
| ·腹水抗体效价的检测 | 第35页 |
| ·单克隆抗体特异性检测 | 第35-36页 |
| ·结果 | 第36-40页 |
| ·BPIV3血凝试验 | 第36页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第36-37页 |
| ·阳性细胞株的筛选 | 第37页 |
| ·单抗腹水的制备和检测 | 第37-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 腹水中IgG的纯化及FITC标记 | 第41-51页 |
| 摘要 | 第41页 |
| ·材料与方法 | 第41-44页 |
| ·病毒株和细胞 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·仪器设备 | 第41页 |
| ·单抗腹水中IgG的纯化 | 第41-42页 |
| ·纯化IgG蛋白浓度检测 | 第42页 |
| ·间接免疫荧光试验检测纯化IgG的抗体效价 | 第42页 |
| ·纯化IgG的FITC标记 | 第42-43页 |
| ·FITC标记IgG敏感性检测 | 第43页 |
| ·FITC标记IgG特异性检测 | 第43页 |
| ·FITC标记IgG直接荧光最佳稀释度的确定 | 第43-44页 |
| ·FITC标记IgG检测BPIV3最低剂量的确定 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-49页 |
| ·单抗腹水的纯化 | 第44-45页 |
| ·纯化IgG蛋白浓度检测结果 | 第45-46页 |
| ·纯化IgG抗体效价检测结果 | 第46页 |
| ·纯化IgG的FITC标记 | 第46-47页 |
| ·FITC标记IgG敏感性结果 | 第47页 |
| ·FITC标记IgG特异性结果 | 第47-48页 |
| ·FITC标记IgG检测BPIV3阈值确定 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 FITC标记IgG初步临床应用 | 第51-59页 |
| 摘要 | 第51页 |
| ·材料与方法 | 第51-55页 |
| ·毒株和细胞 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·实验仪器 | 第51页 |
| ·生物信息学软件 | 第51-52页 |
| ·BPIV3仪公布毒株保守序列分析 | 第52页 |
| ·BPIV3引物设计 | 第52页 |
| ·BPIV3 RNA的提取 | 第52-53页 |
| ·BPIV3 RNA基因组RT-PCR | 第53-54页 |
| ·临床样品的采集和处理 | 第54页 |
| ·临床样品直接免疫荧光方法检测 | 第54-55页 |
| ·样品RT-PCR检测 | 第55页 |
| ·结果 | 第55-58页 |
| ·检测BPIV3用PCR引物的合成 | 第55页 |
| ·临床样品的直接免疫荧光检测 | 第55-56页 |
| ·临床样品RT-PCR检测 | 第56-57页 |
| ·荧光抗体临床应用效果的分析 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 第六章 全文总结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
