| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 英文缩略表 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-20页 |
| ·体外诱导iPS细胞分化为雄性生殖细胞常用的诱导物 | 第15-17页 |
| ·维甲酸(Retinoic acid,RA) | 第15-16页 |
| ·BMP家族 | 第16-17页 |
| ·iPS细胞经不同的分化途径得到雄性生殖细胞 | 第17-18页 |
| ·iPS细胞经过拟胚体分化为雄性生殖细胞 | 第17页 |
| ·iPS细胞与其它细胞共培养诱导分化为雄性生殖细胞 | 第17页 |
| ·iPS细胞在特定的培养基中诱导分化为雄性生殖细胞 | 第17-18页 |
| ·iPS细胞通过单层细胞诱导分化为雄性生殖细胞 | 第18页 |
| ·iPS细胞体外诱导为雄性生殖细胞的应用前景 | 第18-19页 |
| ·展望 | 第19页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 第二章 逆转录病毒载体的扩增与检测 | 第20-25页 |
| ·前言 | 第20页 |
| ·试验材料和仪器 | 第20-21页 |
| ·试验材料 | 第20页 |
| ·试验仪器 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要溶液配制 | 第21页 |
| ·试验方法 | 第21-23页 |
| ·质粒转化 | 第21-22页 |
| ·单克隆挑取 | 第22页 |
| ·质粒小提 | 第22页 |
| ·质粒浓度测定 | 第22页 |
| ·质粒鉴定 | 第22页 |
| ·质粒扩增及大提质粒 | 第22-23页 |
| ·试验结果与分析 | 第23-25页 |
| ·获得单克隆的最佳接种体积 | 第23页 |
| ·逆转录病毒载体浓度和纯度测定 | 第23-24页 |
| ·讨论 | 第24-25页 |
| 第三章 小鼠支持细胞的原代培养 | 第25-32页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·试验材料和仪器 | 第25-26页 |
| ·试验材料 | 第25页 |
| ·试验仪器 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要溶液配制 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-29页 |
| ·明胶处理培养皿 | 第26页 |
| ·小鼠支持细胞原代培养 | 第26-27页 |
| ·小鼠支持细胞传代 | 第27页 |
| ·小鼠支持细胞冻存 | 第27页 |
| ·支持细胞鉴定 | 第27-29页 |
| ·试验结果与分析 | 第29-32页 |
| ·支持细胞生物学特征 | 第29-30页 |
| ·支持细胞PCR鉴定 | 第30页 |
| ·支持细胞免疫荧光鉴定 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| 第四章 小鼠支持细胞体外诱导为iPS细胞 | 第32-42页 |
| ·前言 | 第32页 |
| ·试验材料与仪器 | 第32-33页 |
| ·试验材料 | 第32页 |
| ·试验仪器 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·主要溶液配制 | 第33页 |
| ·试验方法 | 第33-36页 |
| ·小鼠MEF原代培养 | 第33-34页 |
| ·MEF细胞的传代及冻存 | 第34页 |
| ·饲养层的制备 | 第34页 |
| ·Plat-E细胞复苏培养 | 第34页 |
| ·Plat-E细胞传代及冻存 | 第34页 |
| ·Plat-E细胞转染 | 第34-35页 |
| ·病毒液感染支持细胞 | 第35页 |
| ·挑取iPS细胞单克隆 | 第35-36页 |
| ·扩增iPS细胞克隆 | 第36页 |
| ·iPS细胞克隆冻存 | 第36页 |
| ·试验结果与分析 | 第36-42页 |
| ·原代MEF细胞的生物学特性 | 第36-37页 |
| ·逆转录病毒液的获得 | 第37页 |
| ·病毒液感染支持细胞后支持细胞重编程变化过程 | 第37-38页 |
| ·重编程过程中外源基因表达与沉默 | 第38-39页 |
| ·获得iPS细胞 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第五章 iPS细胞体外向雄性生殖细胞分化 | 第42-51页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·试验材料与仪器 | 第42-43页 |
| ·试验材料 | 第42页 |
| ·试验仪器 | 第42-43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要溶液配制 | 第43页 |
| ·试验方法 | 第43-47页 |
| ·AKP染色 | 第43页 |
| ·mES细胞的培养、传代及冻存 | 第43-44页 |
| ·iPS细胞基因表达鉴定 | 第44页 |
| ·拟胚体形成及自分化 | 第44-45页 |
| ·拟胚体自分化基因表达鉴定 | 第45-46页 |
| ·RA诱导拟胚体体外分化 | 第46页 |
| ·RA诱导拟胚体体外分化为雄性生殖细胞的相关基因表达鉴定 | 第46-47页 |
| ·试验结果与分析 | 第47-51页 |
| ·iPS细胞AKP染色 | 第47页 |
| ·iPS细胞多能基因表达模式 | 第47-48页 |
| ·iPS-EBs体外自分化 | 第48页 |
| ·RA诱导iPS细胞体外分化为雄性生殖细胞 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| 第六章 体内移植小鼠支持细胞源的iPS细胞 | 第51-58页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·试验材料与仪器 | 第51-52页 |
| ·试验材料 | 第51-52页 |
| ·试验仪器 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·主要溶液配制 | 第52页 |
| ·试验方法 | 第52-54页 |
| ·白消安处理小鼠 | 第52-53页 |
| ·小鼠睾丸石蜡组织切片 | 第53页 |
| ·小鼠睾丸石蜡组织切片HE染色 | 第53-54页 |
| ·小鼠睾丸输出管移植细胞 | 第54页 |
| ·后代小鼠睾丸细胞及附睾中游离精子DNA的提取 | 第54页 |
| ·后代小鼠睾丸细胞及附睾中游离精子DNA电泳 | 第54页 |
| ·试验结果与分析 | 第54-58页 |
| ·白消安注射后小鼠睾丸变化 | 第54-55页 |
| ·小鼠内源性生殖细胞的消除 | 第55-56页 |
| ·小鼠睾丸输出管移植 | 第56-57页 |
| ·后代阳性小鼠DNA检测 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 第七章 全文结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简历 | 第67页 |
