| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-20页 |
| ·迟钝爱德华氏菌及其致病机制 | 第11-13页 |
| ·迟钝爱德华氏菌的基本介绍 | 第11页 |
| ·迟钝爱德华氏菌的毒力机制研究进展 | 第11-13页 |
| ·宿主免疫系统 | 第13-16页 |
| ·先天性免疫系统 | 第13-16页 |
| ·适应性免疫系统 | 第16页 |
| ·病原菌侵染宿主细胞的机制研究 | 第16-18页 |
| ·病原菌入侵机制 | 第17页 |
| ·病原菌胞内存活机制 | 第17-18页 |
| ·细胞死亡 | 第18-19页 |
| ·凋亡 | 第18页 |
| ·焦亡 | 第18-19页 |
| ·本课题的主要内容和意义 | 第19-20页 |
| 第2章 E.tarda侵染巨噬细胞的胞内过程及机制 | 第20-35页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·药品与仪器设备 | 第20页 |
| ·菌株、质粒及细胞株 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20-22页 |
| ·常用试剂 | 第22页 |
| ·主要技术服务及软件 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌的钙转化 | 第23页 |
| ·细菌质粒和基因组提取 | 第23页 |
| ·迟钝爱德华氏菌感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·迟钝爱德华氏菌的电转化 | 第23-24页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第24页 |
| ·DNA产物纯化及DNA电泳胶回收 | 第24页 |
| ·PCR方法 | 第24页 |
| ·菌落PCR | 第24-26页 |
| ·体外条件下荧光强度的检测 | 第26页 |
| ·巨噬细胞J774A.1的培养 | 第26页 |
| ·巨噬细胞内细菌侵染动力学的测定 | 第26-27页 |
| ·倒置荧光显微镜实时观察胞内细菌复制 | 第27页 |
| ·透射电镜样品制备 | 第27页 |
| ·实验结果 | 第27-32页 |
| ·迟钝爱德华氏菌荧光标记菌株的构建 | 第27-28页 |
| ·迟钝爱德华氏菌荧光标记菌株体外表达荧光强度的测定 | 第28-29页 |
| ·迟钝爱德华氏菌侵染巨噬细胞J774A.1的侵染动力学 | 第29-30页 |
| ·迟钝爱德华氏菌野生株利用T3SS在巨噬细胞内的增殖 | 第30-31页 |
| ·迟钝爱德华氏菌在巨噬细胞J774A.1内的定位 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| ·结论 | 第33-35页 |
| 第3章 E.tarda诱导巨噬细胞焦亡而逃离巨噬细胞 | 第35-46页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·实验材料 | 第35-37页 |
| ·药品与仪器设备 | 第35页 |
| ·菌株,质粒及引物 | 第35页 |
| ·常规培养基以及试剂 | 第35-37页 |
| ·实验方法 | 第37-39页 |
| ·荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第37页 |
| ·炎症小体激活检测 | 第37-38页 |
| ·酶联免疫吸附(ELISA) | 第38-39页 |
| ·细胞毒性LDH检测 | 第39页 |
| ·实验结果 | 第39-44页 |
| ·迟钝爱德华氏菌侵染巨噬细胞后凋亡基因的检测 | 第39-41页 |
| ·迟钝爱德华氏菌侵染巨噬细胞后细胞死亡的检测 | 第41页 |
| ·迟钝爱德华氏菌侵染巨噬细胞后期引起细胞死亡类型的检测 | 第41-43页 |
| ·迟钝爱德华氏菌逃离到细胞上清中的活菌数检测 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44页 |
| ·总结 | 第44-46页 |
| 第4章 逃离巨噬细胞的E. tarda野生株的毒力增强 | 第46-62页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·药品与仪器设备 | 第46页 |
| ·菌株、细胞及小鼠 | 第46页 |
| ·细胞培养基 | 第46-47页 |
| ·化学试剂 | 第47页 |
| ·抑制剂 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-52页 |
| ·从巨噬细胞中逃离出来的EIB202和同步培养的EIB202细菌的制备 | 第47页 |
| ·小鼠原代肺和肾细胞的分离和培养 | 第47-48页 |
| ·迟钝野生株EIB202的二次侵染实验 | 第48页 |
| ·细菌侵染细胞粘附率和内化率 | 第48-49页 |
| ·DAPI和PI染色 | 第49页 |
| ·抑制剂实验 | 第49页 |
| ·细胞内化抑制实验 | 第49页 |
| ·压力应激实验 | 第49页 |
| ·小鼠血清的分离 | 第49-50页 |
| ·抗血清杀伤实验 | 第50页 |
| ·中心粒细胞的分离与培养 | 第50-51页 |
| ·抗中心粒细胞杀伤实验 | 第51页 |
| ·小鼠竞争性实验 | 第51-52页 |
| ·小鼠存活率实验 | 第52页 |
| ·实验结果 | 第52-59页 |
| ·从巨噬细胞中逃离的EIB202在二次感染中引起细胞死亡的检测 | 第52-56页 |
| ·从巨噬细胞中逃离的EIB202在二次感染中引起细胞死亡类型的检测 | 第56-58页 |
| ·从巨噬细胞中逃离的EIB202抵抗宿主杀伤能力的检测 | 第58-59页 |
| ·从巨噬细胞中逃离的EIB202的小鼠体内存活能力检测 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 第5章 从转录组水平考察E.tarda毒力增强的分子机制 | 第62-65页 |
| ·引言 | 第62页 |
| ·实验材料 | 第62页 |
| ·药品与仪器设备 | 第62页 |
| ·菌株、细胞 | 第62页 |
| ·主要技术服务及软件 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-63页 |
| ·从巨噬细胞中逃离出的EIB202和同步培养的EIB202的制备 | 第62页 |
| ·细菌RNA的抽提 | 第62页 |
| ·RNA-seq基因转录水平分析 | 第62-63页 |
| ·实验结果及讨论 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 第6章 结论与展望 | 第65-67页 |
| ·总结 | 第65-66页 |
| ·展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
