猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3蛋白结合肽的筛选与鉴定
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-18页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)简介 | 第10-12页 |
| ·病原学特性 | 第10页 |
| ·流行病学 | 第10页 |
| ·临床表现 | 第10-11页 |
| ·传播途径 | 第11-12页 |
| ·预防和消灭 | 第12页 |
| ·PRRSV GP3 简介 | 第12-15页 |
| ·GP3 的功能及在病毒感染细胞过程中的位置 | 第13页 |
| ·GP3 蛋白的糖基化研究 | 第13-14页 |
| ·GP3 在新型疫苗发展中的作用 | 第14-15页 |
| ·噬菌体展示技术的研究进展 | 第15-17页 |
| ·噬菌体展示技术的基本原理 | 第15页 |
| ·噬菌体展示技术的应用 | 第15-16页 |
| ·展望 | 第16-17页 |
| ·研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-33页 |
| ·材料 | 第18-20页 |
| ·实验动物 | 第18页 |
| ·菌种与载体 | 第18页 |
| ·主要工具酶 | 第18页 |
| ·标准参照物 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·仪器设备 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-33页 |
| ·ORF3 基因 PCR 扩增 | 第20页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第20-23页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第23-24页 |
| ·重组 GST-GP3 诱导表达 | 第24-26页 |
| ·重组蛋白 GST-GP3 的纯化与复性 | 第26-27页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第27页 |
| ·多克隆抗血清的鉴定 | 第27页 |
| ·噬菌体随机十二肽库对靶蛋白的生物筛选 | 第27-29页 |
| ·结合克隆的特征鉴定 | 第29-31页 |
| ·所选多肽结合功能的检测 | 第31页 |
| ·筛选出的噬菌体及其多肽的抗病毒试验 | 第31-33页 |
| 3 结果 | 第33-47页 |
| ·PGEX-6P-GP3 重组质粒的建立与检测 | 第33-35页 |
| ·ORF3 基因 PCR 扩增并与载体连接 | 第33页 |
| ·重组质粒的限制性酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组表达质粒的 PCR 鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第35页 |
| ·蛋白纯化与 WESTERN-BLOT 鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·GP3 多克隆抗血清的制备及活性鉴定 | 第36-38页 |
| ·多抗与其他猪病毒的交叉 ELISA 试验 | 第36-37页 |
| ·多抗血清效价及特异性鉴定 | 第37-38页 |
| ·噬菌体文库对 GST-GP3 重组蛋白的筛选 | 第38-42页 |
| ·淘洗产物的滴度测定结果 | 第38页 |
| ·噬菌体结合克隆模板 DNA 的 PCR 结果 | 第38-39页 |
| ·噬菌体结合克隆的 ELISA 初步鉴定结果 | 第39页 |
| ·噬菌体结合克隆的核苷酸序列测定结果 | 第39-40页 |
| ·噬菌体 ELISA 对 PRRSV 的鉴别诊断 | 第40-41页 |
| ·噬菌体 ELISA 的敏感性检测 | 第41-42页 |
| ·合成多肽的生物活性检测结果 | 第42-47页 |
| ·噬菌体蓝斑检测多肽与靶蛋白的结合效果 | 第42页 |
| ·间接免疫荧光检测多肽和噬菌体的抗病毒效果 | 第42-45页 |
| ·流式细胞术检测多肽体外抗病毒效果 | 第45-47页 |
| 4. 讨论 | 第47-49页 |
| ·ORF3 基因在大肠杆菌中的表达 | 第47页 |
| ·噬菌体的抗病毒应用 | 第47页 |
| ·多肽的应用及前景 | 第47-49页 |
| 5. 结论 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第57页 |
