| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 1 引言 | 第13-22页 |
| ·研究目的与意义 | 第13-14页 |
| ·文献综述 | 第14-22页 |
| ·丝状真菌表达系统的研究进展 | 第14-18页 |
| ·食品级表达系统的研究情况 | 第18-19页 |
| ·木聚糖酶的应用情况 | 第19-20页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-34页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·菌株和载体 | 第22页 |
| ·酶和主要生物化学试剂 | 第22-23页 |
| ·常用试剂的配置 | 第23-25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·主要实验仪器 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-34页 |
| ·黑曲霉基因组的提取 | 第25-26页 |
| ·基因克隆 | 第26-30页 |
| ·根癌农杆菌介导的黑曲霉的遗传转化 | 第30-31页 |
| ·同源重组菌株中潮霉素抗性基因的消除 | 第31-32页 |
| ·重组菌株的木聚糖酶活性测定 | 第32-33页 |
| ·重组菌株分泌蛋白检测 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-54页 |
| ·木聚糖酶基因 xyn2 和 xynB 表达载体的构建 | 第34-41页 |
| ·xyn2 基因同源重组表达框的构建 | 第34-36页 |
| ·xynB 基因同源重组表达框的构建 | 第36-38页 |
| ·木聚糖酶基因黑曲霉表达载体 pSZH-xyn2 和 pSZH-xynB 的构建 | 第38-41页 |
| ·农杆菌介导法对黑曲霉的遗传转化 | 第41-44页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第41-42页 |
| ·农杆菌转化子与黑曲霉的共培养 | 第42页 |
| ·黑曲霉转化子的筛选和鉴定 | 第42-44页 |
| ·xynB 基因同源重组转化子的筛选 | 第44页 |
| ·xynB 基因同源重组菌株中 hph 基因的删除 | 第44-46页 |
| ·木聚糖酶在重组菌株中的表达 | 第46-48页 |
| ·木糖标准曲线的绘制 | 第46-47页 |
| ·xyn2 基因重组菌株木聚糖酶活性的测定 | 第47页 |
| ·xynB 基因在重组菌株中的表达 | 第47-48页 |
| ·xynB 基因同源重组菌株发酵培养基的优化 | 第48-54页 |
| ·糖化酶发酵培养基中重组菌株的表达情况 | 第48-49页 |
| ·发酵培养基中碳源对重组菌株产酶的影响 | 第49-51页 |
| ·发酵培养基中氮源对重组菌株产酶的影响 | 第51页 |
| ·诱导物对重组菌株产酶的影响 | 第51-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| ·农杆菌介导法转化黑曲霉的优点 | 第54页 |
| ·黑曲霉安全高效表达系统的优势 | 第54页 |
| ·纯合同源重组菌株发酵条件的优化 | 第54-55页 |
| ·其他主要分泌蛋白基因的删除 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-58页 |
| ·木聚糖酶基因同源重组表达框的构建 | 第56页 |
| ·木聚糖酶基因黑曲霉表达载体的构建 | 第56页 |
| ·黑曲霉转化子的筛选 | 第56页 |
| ·同源重组转化子的筛选 | 第56页 |
| ·同源重组菌株中 hph 基因的删除 | 第56页 |
| ·同源重组菌株发酵条件的优化 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第64页 |
