| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-51页 |
| ·耐辐射异常球菌研究进展 | 第19-26页 |
| ·耐辐射异常球菌的分离及其生理特性 | 第19-20页 |
| ·耐辐射异常球菌的极端抗性 | 第20-23页 |
| ·耐辐射异常球菌DNA损伤修复机制 | 第23-26页 |
| ·耐辐射异常球菌胁迫抗性全局调控蛋白IrrE | 第26-36页 |
| ·IrrE蛋白的发现 | 第26-27页 |
| ·IrrE的蛋白结构域分析 | 第27-30页 |
| ·IrrE的功能鉴定 | 第30-31页 |
| ·耐辐射异常球菌IrrE的作用机制 | 第31-33页 |
| ·IrrE的异源表达提高宿主的胁迫抗性 | 第33-36页 |
| ·细菌渗透调节机制研究进展 | 第36-42页 |
| ·细菌渗透胁迫应答机制 | 第36-40页 |
| ·细菌耐盐抗渗机制中的重要功能蛋白 | 第40-41页 |
| ·细菌耐盐抗渗机制中的重要调控蛋白 | 第41-42页 |
| ·蛋白质组学关键技术及其在微生物功能基因组学研究中的应用 | 第42-49页 |
| ·双向电泳技术是蛋白质组学研究的核心技术之一 | 第42-47页 |
| ·蛋白质组学在微生物功能基因组研究中的应用 | 第47-49页 |
| ·立题依据和技术路线 | 第49-51页 |
| ·立题依据 | 第49-50页 |
| ·技术路线 | 第50-51页 |
| 第二章 IrrE重组大肠杆菌的基因调控网络分析 | 第51-97页 |
| ·材料与方法 | 第51-72页 |
| ·菌株、质粒来源 | 第51-52页 |
| ·培养基、酶类及生化试剂 | 第52-57页 |
| ·主要仪器设备 | 第57-58页 |
| ·培养条件 | 第58-59页 |
| ·菌株基因组及质粒的提取 | 第59-60页 |
| ·PCR反应 | 第60-62页 |
| ·高保真Taq酶扩增产物末端加A方法 | 第62页 |
| ·DNA片段的回收与纯化 | 第62-63页 |
| ·DNA片段的酶切与连接 | 第63-64页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第64页 |
| ·生长曲线的测定 | 第64-65页 |
| ·融合蛋白的表达与纯化 | 第65-66页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第66-67页 |
| ·Western Blot 杂交检测 | 第67-68页 |
| ·菌株底物代谢变化BioLog分析 | 第68页 |
| ·蛋白质组学分析样品的蛋白制备 | 第68-69页 |
| ·蛋白质组学分析样品的蛋白定量 | 第69页 |
| ·双向聚丙烯酰胺凝胶电泳（2D-PAGE） | 第69-71页 |
| ·凝胶图像采集与分析 | 第71页 |
| ·蛋白点的切取和胶内酶切 | 第71页 |
| ·MALDI-TOF/MS分析 | 第71页 |
| ·数据库查询 | 第71-72页 |
| ·IrrE重组大肠杆菌基因芯片数据分析 | 第72页 |
| ·结果 | 第72-86页 |
| ·IrrE蛋白组成型表达载体的构建 | 第72-74页 |
| ·IrrE大肠杆菌高效表达载体的构建 | 第74-76页 |
| ·IrrE蛋白的原核高效表达与纯化 | 第76-77页 |
| ·Western Blot检测IrrE在大肠杆菌中的表达 | 第77-78页 |
| ·IrrE重组大肠杆菌的生长曲线分析 | 第78-79页 |
| ·IrrE重组大肠杆菌的底物代谢谱测定 | 第79-81页 |
| ·IrrE的表达对重组菌代谢网络影响的蛋白质组学分析 | 第81-82页 |
| ·正常生长条件下IrrE重组菌株的上调蛋白 | 第82-85页 |
| ·正常生长条件下IrrE重组菌株的下调蛋白 | 第85-86页 |
| ·讨论 | 第86-97页 |
| ·IrrE提高重组菌一般胁迫抗性 | 第86页 |
| ·IrrE提高重组菌山梨醇利用能力 | 第86-87页 |
| ·IrrE对重组菌麦芽糖代谢的影响 | 第87-88页 |
| ·IrrE对重组菌氨基酸代谢的影响 | 第88页 |
| ·IrrE对重组菌的全局调控作用 | 第88-89页 |
| ·IrrE对抗逆相关蛋白的调控 | 第89-90页 |
| ·IrrE的转录级联调控作用 | 第90-96页 |
| ·全局调控蛋白IrrE的水平转移 | 第96-97页 |
| 第三章 盐胁迫下IrrE重组大肠杆菌的蛋白表达谱分析 | 第97-129页 |
| ·材料与方法 | 第97-104页 |
| ·菌株、质粒来源 | 第97页 |
| ·培养基、酶类及生化试剂 | 第97-100页 |
| ·主要仪器设备和软件 | 第100页 |
| ·培养条件 | 第100-101页 |
| ·生长曲线的测定 | 第101页 |
| ·生理生化及耐盐实验分析 | 第101-103页 |
| ·蛋白质组学分析的样品制备 | 第103页 |
| ·蛋白样品的定量 | 第103页 |
| ·双向聚丙烯酰胺凝胶电泳（2D-PAGE） | 第103页 |
| ·凝胶图像采集与分析 | 第103页 |
| ·蛋白点的切取和胶内酶切 | 第103页 |
| ·MALDI-TOF/MS分析 | 第103页 |
| ·数据库查询 | 第103页 |
| ·细胞甘油含量的测定 | 第103-104页 |
| ·盐冲击下IrrE重组大肠杆菌基因芯片数据分析 | 第104页 |
| ·结果 | 第104-118页 |
| ·IrrE表达对大肠杆菌氧化抗性的影响 | 第104-105页 |
| ·IrrE表达对大肠杆菌高温耐受力的影响 | 第105-106页 |
| ·IrrE表达对大肠杆菌抗酸碱能力的影响 | 第106页 |
| ·IrrE表达对提高大肠杆菌耐盐性的研究 | 第106-108页 |
| ·盐冲击条件下IrrE重组菌株蛋白谱差异分析 | 第108-109页 |
| ·盐冲击条件下IrrE重组菌株上调蛋白 | 第109-112页 |
| ·盐冲击条件下IrrE重组菌株下调蛋白 | 第112-115页 |
| ·盐冲击条件下，IrrE增强核苷酸合成蛋白的表达 | 第115-116页 |
| ·盐冲击条件下，IrrE增强胁迫抗性相关蛋白的表达 | 第116-117页 |
| ·盐冲击条件下，IrrE抑制甘油降解途径相关蛋白的表达 | 第117页 |
| ·盐冲击条件下，IrrE提高细胞甘油含量的积累 | 第117-118页 |
| ·讨论 | 第118-129页 |
| ·IrrE重组菌株的高温和氧化抗性 | 第118-119页 |
| ·渗透保护物质甘油的积累 | 第119-121页 |
| ·盐冲击下IrrE对胁迫抗性蛋白调控作用 | 第121-125页 |
| ·盐冲击下IrrE对RpoS的调控作用 | 第125-126页 |
| ·IrrE提高细胞盐胁迫抗性 | 第126-129页 |
| 第四章 IrrE蛋白N-端结构域的截短分析 | 第129-154页 |
| ·材料与方法 | 第129-139页 |
| ·菌株、质粒来源 | 第129-130页 |
| ·培养基、酶类及生化试剂 | 第130-132页 |
| ·主要仪器设备 | 第132页 |
| ·细菌培养 | 第132页 |
| ·菌株基因组DNA及质粒DNA的提取 | 第132-134页 |
| ·PCR引物反应及反应条件 | 第134-135页 |
| ·DNA片段的回收与纯化 | 第135-136页 |
| ·DNA片段的酶切与连接 | 第136-137页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第137页 |
| ·耐辐射异常球菌的线性DNA转化 | 第137-138页 |
| ·氨基酸多序列比对 | 第138页 |
| ·细菌生存曲线的测定 | 第138-139页 |
| ·电离辐照后菌体生长的测定 | 第139页 |
| ·结果 | 第139-151页 |
| ·耐辐射异常球菌突变株ΔIrrE的构建 | 第139-141页 |
| ·耐辐射异常球菌突变株ΔIrrE的纯化与验证 | 第141-142页 |
| ·ΔIrrE突变株电离辐射后生长情况和生存率 | 第142-144页 |
| ·IrrE蛋白的结构分析及截断设计 | 第144-146页 |
| ·不同IrrE基因片段功能回补质粒的构建 | 第146-148页 |
| ·电离辐射后回补截断IrrE菌株的生长 | 第148-149页 |
| ·回补截短IrrE菌株的辐射生存率曲线 | 第149-151页 |
| ·讨论 | 第151-154页 |
| 第五章 结论 | 第154-156页 |
| 参考文献 | 第156-170页 |
| 致谢 | 第170-171页 |
| 作者简介 | 第171-172页 |
