利用转基因小鼠模型进行转基因动物安全评价研究
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 综述转基因动物安全评价 | 第13-26页 |
| ·转基因动物安全评价概述 | 第13-15页 |
| ·转基因动物概念区分 | 第13-14页 |
| ·转基因动物研究历史 | 第14页 |
| ·转基因动物制作方法及应用 | 第14-15页 |
| ·转基因动物安全问题 | 第15-18页 |
| ·表型分析 | 第15-16页 |
| ·抽样 | 第16页 |
| ·售后监控 | 第16页 |
| ·内源病毒 | 第16-17页 |
| ·伦理问题 | 第17-18页 |
| ·转基因动物检测技术 | 第18-26页 |
| ·DNA 水平的检测 | 第18-19页 |
| ·插入位点检测 | 第19-22页 |
| ·拷贝数的检测 | 第22-24页 |
| ·表达外源蛋白的检测 | 第24页 |
| ·转基因动物个体水平的检测 | 第24-26页 |
| 第二章 转基因阳性鼠检测 | 第26-34页 |
| ·试验材料 | 第26-28页 |
| ·试验动物 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·主要试剂的配制 | 第27-28页 |
| ·试验方法 | 第28-31页 |
| ·总DNA 提取 | 第28页 |
| ·PCR 检测 | 第28-30页 |
| ·SOUTHERN 杂交检测 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-33页 |
| ·DNA 提取 | 第32页 |
| ·SOUTHERN 杂交 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 转基因结构的检测 | 第34-41页 |
| ·试验材料 | 第34页 |
| ·试验方法 | 第34-36页 |
| ·单一PCR 检测 | 第34-36页 |
| ·多重PCR 检测 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-39页 |
| ·单一PCR 结果 | 第36-37页 |
| ·多重PCR 结果 | 第37-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 外源基因整合位点的检测 | 第41-47页 |
| ·试验材料 | 第41页 |
| ·试验方法 | 第41-43页 |
| ·TAIL-PCR 引物设计与合成 | 第41-42页 |
| ·扩增体系和程序 | 第42-43页 |
| ·PCR 产物的鉴定 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-45页 |
| ·TAIL-PCR 扩增片段的克隆和测序 | 第43-44页 |
| ·外源基因插入区段侧翼序列分析 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 外源基因拷贝数的检测 | 第47-54页 |
| ·试验材料 | 第47页 |
| ·试验方法 | 第47-49页 |
| ·TAQMAN 荧光定量PCR 引物及探针设计 | 第47-48页 |
| ·普通PCR 检测引物特异性及灵敏度 | 第48页 |
| ·质粒标准品的制备 | 第48页 |
| ·荧光定量PCR 扩增体系和程序 | 第48-49页 |
| ·外源基因拷贝数的计算 | 第49页 |
| ·结果与分析 | 第49-52页 |
| ·PCR 检测敏感性和特异性 | 第49页 |
| ·荧光定量PCR 标准曲线的制定 | 第49-52页 |
| ·外源基因拷贝数的计算 | 第52页 |
| ·小结与讨论 | 第52-54页 |
| ·内源基因的确定 | 第52页 |
| ·质粒标准品的制备 | 第52-53页 |
| ·相对定量方法的选择 | 第53页 |
| ·插入拷贝数对基因表达的影响 | 第53-54页 |
| 第六章 结论 | 第54-55页 |
| ·主要结论 | 第54页 |
| ·创新点 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简历 | 第66页 |
