| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 1 绪论 | 第10-16页 |
| ·研究背景 | 第10-11页 |
| ·松材线虫病的经济重要性 | 第10页 |
| ·松材线虫病已有的检验鉴定方法 | 第10-11页 |
| ·植物病害生物检测技术的发展趋势 | 第11页 |
| ·研究的目的和意义 | 第11-12页 |
| ·研究的目标 | 第12页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第12-14页 |
| ·样品DNA 的快速制备 | 第12-13页 |
| ·松材线虫与拟松材线虫常规PCR 检测体系的建立 | 第13页 |
| ·松材线虫的定量PCR 检测 | 第13-14页 |
| ·松材线虫检测试剂固相化 | 第14页 |
| ·本研究的创新点 | 第14-16页 |
| 2 文献综述 | 第16-30页 |
| ·引言 | 第16页 |
| ·松材线虫病简介 | 第16-18页 |
| ·松材线虫病发病规律 | 第16-17页 |
| ·松材线虫病的危害及症状 | 第17页 |
| ·松材线虫传播途径 | 第17页 |
| ·松材线虫的媒介昆虫和寄主树种 | 第17-18页 |
| ·松材线虫病检验鉴定方法国内外研究进展 | 第18-28页 |
| ·症状诊断 | 第18-19页 |
| ·形态鉴定 | 第19-20页 |
| ·化学指标鉴定 | 第20-21页 |
| ·生物化学检测法 | 第21-23页 |
| ·分子生物学方法 | 第23-28页 |
| ·ITS 区的基本结构特点及运用 | 第28-30页 |
| ·ITS 的基本结构 | 第28页 |
| ·ITS 区的特点和运用 | 第28-30页 |
| 3 材料和方法 | 第30-44页 |
| ·供试材料及采集方法 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·主要试剂、培养基及其配制 | 第31-33页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·试剂及培养基配置 | 第31-33页 |
| ·检验样品制备 | 第33页 |
| ·线虫的分离 | 第33页 |
| ·线虫的富集培养 | 第33页 |
| ·线虫DNA 的快速制备 | 第33-35页 |
| ·多条线虫DNA 的提取 | 第33-35页 |
| ·单条线虫DNA 的提取 | 第35页 |
| ·DNA 浓度的测定 | 第35页 |
| ·松材线虫和拟松材线虫PCR 检测体系的建立 | 第35-41页 |
| ·松材线虫特异性引物的设计与筛选 | 第35-36页 |
| ·拟松材线虫特异性引物的设计与筛选 | 第36-37页 |
| ·松材线虫 PCR 扩增条件的优化 | 第37-38页 |
| ·拟松材线虫 PCR 扩增条件的优化 | 第38页 |
| ·松材线虫、拟松材线虫双重 PCR 扩增条件的优化 | 第38页 |
| ·松材线虫PCR 检测性能测定 | 第38-39页 |
| ·松材线虫PCR 扩增结果验证及无害化阳性对照制备 | 第39-41页 |
| ·松材线虫和拟松材线虫双重PCR 特异性的测定 | 第41页 |
| ·松材线虫定量PCR 的检测 | 第41-42页 |
| ·松材线虫定量PCR 体系的建立 | 第41页 |
| ·松材线虫定量PCR 特异性检测 | 第41-42页 |
| ·松材线虫定量PCR 灵敏度检测及标准曲线的绘制 | 第42页 |
| ·样品的实际检测 | 第42页 |
| ·检测试剂盒的研制 | 第42-44页 |
| ·检测试剂储存稳定性试验 | 第42页 |
| ·松材线虫实际样品检测 | 第42-44页 |
| 4 结果 | 第44-62页 |
| ·线虫不同分离方法效果比较 | 第44页 |
| ·不同制样方法比较 | 第44-47页 |
| ·多条线虫DNA 的不同制样方法比较 | 第44-46页 |
| ·单条线虫DNA 的提取 | 第46-47页 |
| ·引物的设计筛选 | 第47页 |
| ·松材线虫引物设计筛选 | 第47页 |
| ·拟松材线虫引物设计筛选 | 第47页 |
| ·PCR 扩增条件和反应程序 | 第47-52页 |
| ·松材线虫PCR 扩增条件和反应程序 | 第47-50页 |
| ·拟松材线虫PCR 扩增条件和反应程序 | 第50页 |
| ·松材线虫－拟松材线虫双重PCR 扩增条件和反应程序 | 第50-52页 |
| ·PCR 检测性能测定 | 第52-57页 |
| ·松材线虫PCR 特异性、灵敏性检测 | 第52-56页 |
| ·松材线虫、拟松材线虫双重PCR 检测性能 | 第56-57页 |
| ·松材线虫定量 PCR 检测体系 | 第57-62页 |
| ·退火温度优化 | 第57-58页 |
| ·定量PCR 特异性检测 | 第58-59页 |
| ·定量PCR 灵敏度的检测及标准曲线的绘制 | 第59-62页 |
| 5 讨论 | 第62-68页 |
| ·不同分离方法对分离线虫效率的影响 | 第62页 |
| ·松材线虫DNA 制样方法的比较 | 第62-63页 |
| ·引物特异性比较 | 第63-64页 |
| ·松材线虫、拟松材线虫双重PCR 检测体系的建立 | 第64-65页 |
| ·无害化参照体系的构建与意义 | 第65页 |
| ·常规PCR 与荧光定量PCR 检测松材线虫的比较 | 第65-66页 |
| ·固相化试剂盒的应用价值 | 第66-68页 |
| 6 结论与后续工作 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附录 | 第78-85页 |
