| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-10页 |
| 1 绪论 | 第10-21页 |
| ·研究的背景与意义 | 第10-11页 |
| ·绿僵菌的研究概况 | 第11-13页 |
| ·分类与寄主范围 | 第11页 |
| ·营养要求 | 第11-12页 |
| ·生长发育的环境条件 | 第12页 |
| ·生物化学和分子生物学研究 | 第12-13页 |
| ·微循环产孢的研究现状 | 第13-14页 |
| ·抑制性扣除杂交技术（SSH）及其研究进展 | 第14-17页 |
| ·SSH的原理 | 第14-15页 |
| ·SSH技术评价 | 第15-17页 |
| ·SSH 技术的应用 | 第17页 |
| ·均一化技术的研究进展 | 第17-18页 |
| ·常用的均一化技术 | 第17-18页 |
| ·基于DSN 的均一化技术 | 第18页 |
| ·立题依据和研究目标 | 第18-19页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第19-20页 |
| ·研究的内容 | 第19页 |
| ·技术路线 | 第19-20页 |
| ·本研究创新之处 | 第20-21页 |
| 2 微循环产孢培养基的筛选和生物学特征 | 第21-26页 |
| ·材料与方法 | 第21-22页 |
| ·供试菌株和昆虫 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·供试菌株培养及分生孢子悬浮液制备 | 第21-22页 |
| ·微循环产孢培养基的筛选 | 第22页 |
| ·微循环产孢产孢量的测定 | 第22页 |
| ·室内孢子毒力的测定 | 第22页 |
| ·结果与分析 | 第22-26页 |
| ·金龟子绿僵菌微循环产孢培养基的筛选 | 第22-23页 |
| ·产孢方式和菌落特点 | 第23-24页 |
| ·产孢能力的比较 | 第24页 |
| ·室内毒力的测定 | 第24-26页 |
| 3 绿僵菌微循环产孢阶段全长均一化文库的构建 | 第26-37页 |
| ·材料与方法 | 第26-34页 |
| ·供试菌株 | 第26页 |
| ·培养基和部分储存液的配制 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·绿僵菌的培养和收集 | 第27页 |
| ·mRNA 的提取 | 第27-28页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第28-29页 |
| ·cDNA 第二链的合成 | 第29页 |
| ·全长cDNA 的均一化 | 第29-30页 |
| ·均一化效果检测 | 第30页 |
| ·cDNA 片段的酶切和分级分离 | 第30-31页 |
| ·cDNA 与载体pDNR-lib 连接 | 第31页 |
| ·转化 | 第31-32页 |
| ·文库质量的鉴定 | 第32-34页 |
| ·结果和分析 | 第34-37页 |
| ·mRNA 的分离 | 第34页 |
| ·全长cDNA 的合成 | 第34页 |
| ·均一化效果检测 | 第34-35页 |
| ·文库滴度和插入片断大小分析 | 第35-36页 |
| ·测序结果分析 | 第36-37页 |
| 4 利用抑制性扣除杂交技术克隆绿僵菌微循环产孢相关基因 | 第37-56页 |
| ·材料与方法 | 第37-45页 |
| ·供试菌株 | 第37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·培养基及部分储液配方 | 第37-38页 |
| ·试验材料的准备 | 第38页 |
| ·mRNA 的提取 | 第38页 |
| ·cDNA 的合成 | 第38-39页 |
| ·RsaI 酶切 | 第39页 |
| ·接头连接和连接效率检测 | 第39-41页 |
| ·两次差减杂交 | 第41页 |
| ·两次PCR 扩增 | 第41-42页 |
| ·差减产物的克隆和检测 | 第42-43页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第43-45页 |
| ·阳性克隆的测序和EST 序列分析 | 第45页 |
| ·结果和分析 | 第45-56页 |
| ·试验材料的准备 | 第45页 |
| ·连接效率检测 | 第45-46页 |
| ·差减效率检测 | 第46-47页 |
| ·差减杂交 PCR 产物分析 | 第47页 |
| ·插入片断大小检测 | 第47-48页 |
| ·差减文库的筛选 | 第48-49页 |
| ·测序结果和分析 | 第49-56页 |
| 5 讨论 | 第56-59页 |
| ·关于微循环产孢的诱导 | 第56页 |
| ·基于DSN 的均一化文库构建技术 | 第56-57页 |
| ·基于SSH 技术的EST 测序量 | 第57-58页 |
| ·微循环产孢机制初步探讨 | 第58-59页 |
| 6 结论与后续工作 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 附录 | 第66页 |