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银白杨再生体系建立及rolB-pttGA20ox双价基因遗传转化促进生根和高生长的研究

摘 要第1-5页
Abstract第5-7页
本文缩略词第7-12页
1 引言第12-26页
   ·本研究的目的和意义第12-13页
   ·杨树的离体再生及遗传转化系统研究进展第13-15页
     ·影响杨树离体再生的有关因子研究第13-14页
     ·杨树遗传转化系统的研究现状第14-15页
       ·遗传转化方法第14-15页
       ·影响农杆菌转化效果的主要因素第15页
   ·Ri 质粒及rolB 基因在促进植物生根中的作用及其研究进展第15-22页
     ·发根农杆菌及Ri 质粒第15-16页
     ·rol(rooting locus)基因的发现及功能第16-17页
     ·rolB 基因的作用机理第17-19页
     ·Ri 质粒及rol 基因的应用第19-22页
       ·促进植物生根第19-20页
       ·改良植物株型第20页
       ·增强植物抗逆性第20页
       ·提高植株的生长量和品质第20-21页
       ·生产次生代谢物质第21页
       ·开花诱导和花发育调控研究第21-22页
   ·赤霉素在促进植物顶端优势中的作用及研究进展第22-24页
     ·赤霉素简介第22页
     ·赤霉素促进植物伸长的机理第22-24页
       ·GA 促进细胞分裂第22页
       ·诱导膨胀素的产生或活性增加第22-23页
       ·提高木葡聚糖内转葡糖基酶的活性第23页
       ·促进微管与细胞长轴呈垂直排列第23页
       ·GA 诱导植物茎基因的表达第23-24页
   ·研究的主要内容与技术路线第24-26页
2 银白杨高效再生体系的建立及其优化第26-60页
   ·材料与方法第26-33页
     ·银白杨组织培养的材料与方法第26-30页
       ·接种材料第26页
       ·外植体的表面灭菌第26-27页
       ·启动培养设计方案第27-28页
       ·继代增殖培养设计方案第28-29页
       ·壮苗培养第29页
       ·生根实验设计方案第29-30页
       ·炼苗及移栽第30页
     ·银白杨叶片再生体系建立的材料与方法第30-31页
       ·试管植株的获得和接种材料第30页
       ·最佳植物生长调节剂组合的筛选第30页
       ·不同材料来源叶片不定芽再生率的比较第30-31页
       ·不同着生位置叶片不定芽再生率的比较第31页
       ·其他因子对叶片不定芽分化的影响第31页
     ·银白杨组培苗玻璃化研究的材料与方法第31-32页
       ·实验材料第31页
       ·形态解剖学观察第31页
       ·各项生理生化指标的测定第31-32页
     ·数据统计与分析第32-33页
   ·结果与分析第33-54页
     ·银白杨组织培养结果与分析第33-45页
       ·不同灭菌处理对外植体成活率的影响第33-35页
       ·启动培养最佳方案的建立第35-38页
       ·增殖继代培养第38-43页
       ·壮苗培养第43页
       ·生根培养第43-45页
     ·叶片不定芽再生影响因素的研究第45-50页
       ·叶片不定芽诱导最佳植物生长调节剂组合的筛选第45-47页
       ·无根与生根试管苗叶片不定芽再生率的比较第47页
       ·不同取材位置对叶片不定芽再生率的影响第47-48页
       ·其他因子对叶片不定芽再生的影响第48-50页
     ·银白杨组培苗玻璃化研究的结果与分析第50-54页
       ·玻璃苗与正常试管苗的外表形态结构差异第50页
       ·解剖结构特点第50-53页
       ·玻璃苗在水分、叶绿素及可溶性蛋白、可溶性糖含量上的变化第53页
       ·玻璃苗与正常苗相对电导率、MDA、SOD、POD、CAT 等生化指标的差异第53-54页
       ·试管苗的可溶性蛋白质电泳分析第54页
   ·讨论第54-60页
     ·银白杨外植体的消毒与处理第54-55页
     ·培养基对组培结果的影响第55页
     ·植物生长调节剂的影响第55-56页
     ·培养条件对银白杨不定芽增殖的影响第56-57页
     ·生根及炼苗移栽第57页
     ·银白杨叶片不定芽再生的影响因素第57-58页
     ·银白杨试管苗玻璃化的机理第58-59页
     ·银白杨试管苗玻璃化的防治第59-60页
3 农杆菌介导的银白杨遗传转化体系的建立与优化第60-83页
   ·材料第60-63页
     ·植物受体材料第60页
     ·农杆菌与质粒第60-62页
     ·培养基第62-63页
     ·试剂第63页
     ·主要仪器设备第63页
   ·方法第63-66页
     ·银白杨转化体系中抗生素浓度实验第63-64页
       ·卡那霉素对银白杨叶片再生、茎段分化及组培苗生根的影响第63页
       ·G418 对银白杨叶片再生、茎段分化及组培苗生根的影响第63页
       ·头孢霉素对银白杨叶片再生、茎段分化及组培苗生根的影响第63页
       ·羧苄青霉素对银白杨叶片再生、茎段分化及组培苗生根的影响第63页
       ·不同抗生素对农杆菌抑制效果测定第63-64页
     ·农杆菌的活化培养第64页
     ·农杆菌介导的银白杨遗传转化程序第64-65页
     ·影响银白杨转化效果的因素筛选第65-66页
       ·预培养时间第65页
       ·侵染时间和菌液浓度第65页
       ·共培养时间第65页
       ·侵染菌液的制备方法第65页
       ·添加乙酰丁香酮的处理第65页
       ·延迟选择第65-66页
     ·评价指标第66页
   ·结果与分析第66-78页
     ·银白杨遗传转化中抗生素浓度优化的研究第66-71页
       ·卡那霉素对银白杨叶片再生、茎段分化及组培苗生根的影响第66-67页
       ·G418 对银白杨叶片再生、茎段分化及组培苗生根的影响第67-68页
       ·头孢霉素对银白杨叶片再生、茎段分化及组培苗生根的影响第68页
       ·羧苄青霉素对银白杨叶片再生、茎段分化及组培苗生根的影响第68-69页
       ·羧苄青霉素和头孢霉素的抑菌效果第69-71页
     ·银白杨高效遗传转化系统的建立第71-78页
       ·预培养时间对银白杨产生抗性芽的影响第71-72页
       ·菌液浓度和侵染时间对银白杨产生抗性芽的影响第72-73页
       ·共培养时间对银白杨产生抗性芽的影响第73-74页
       ·乙酰丁香酮对银白杨遗传转化率的影响第74-76页
       ·菌液的制备方法对银白杨遗传转化率的影响第76-77页
       ·延迟选择天数对银白杨遗传转化率的影响第77页
       ·银白杨抗性芽的获得和生根第77-78页
   ·讨论第78-83页
     ·抗生素种类选择及敏感性测定第78-79页
     ·遗传转化体系的研究第79-83页
       ·预培养时间第79-80页
       ·共培养对遗传转化的影响第80页
       ·菌液浓度和侵染时间对遗传转化的影响第80-81页
       ·乙酰丁香酮对遗传转化的影响第81页
       ·延迟选择的时间第81-82页
       ·选择培养的选择方法第82-83页
4 转基因银白杨植株的检测与鉴定第83-100页
   ·材料与方法第83-92页
     ·材料第83-84页
       ·植物材料第83页
       ·质粒和菌株第83页
       ·主要实验试剂及仪器第83-84页
       ·PCR 扩增所需引物序列第84页
       ·培养基第84页
     ·方法第84-92页
       ·转基因植株叶片再生的卡那霉素抗性鉴定第84-85页
       ·质粒DNA 的提取第85-86页
       ·PCR 检测第86-88页
       ·Southern-blot 分析第88-92页
   ·结果与分析第92-96页
     ·卡那霉素抗性鉴定转基因植株的叶片再生能力第92页
     ·转rolB 基因的PCR 检测第92-93页
     ·转rolB-pttGA200x 双价基因的PCR 检测第93-94页
     ·转rolB 基因的Southern 杂交分析第94-95页
       ·酶切效果第94-95页
       ·杂交效果第95页
     ·转rolB-pttGA200x 双价基因的Southern 杂交分析第95-96页
       ·酶切效果第95-96页
       ·杂交效果第96页
   ·讨论第96-100页
     ·转化植株叶片再生的卡那霉素抗性鉴定第96-97页
     ·PCR 鉴定第97页
     ·Southern blotting 鉴定第97-99页
       ·DNA 样品的制备第98页
       ·电泳、转膜和固定第98页
       ·预杂交和杂交第98-99页
     ·关于假转化和假阳性植株第99-100页
5 银白杨转基因植株外源基因表达的初步测定第100-104页
   ·材料与方法第100-101页
     ·实验材料第100页
     ·实验方法第100-101页
       ·转基因银白杨的表型性状变异分析第100页
       ·转基因银白杨的生根能力变异分析第100页
       ·转基因银白杨的高生长能力变异分析第100-101页
   ·结果与分析第101-103页
     ·转rolB 基因银白杨的形态变异第101页
     ·转rolB-pttGA200x 双价基因银白杨的形态变异第101页
     ·转基因银白杨植株的生根时间和生根数量的变化第101-102页
     ·转基因银白杨植株的高生长和节间伸长速度的变化分析第102-103页
   ·讨论第103-104页
参考文献第104-112页
图版1 银白杨高效再生体系的建立第112-113页
图版2 银白杨抗生素敏感性实验第113-115页
图版3 银白杨抗性芽的获得和生根第115-116页
图版4 转基因银白杨组培苗比较第116-117页
个人简历第117-118页
导师简介第118-119页
致谢第119-120页
博硕士学位论文同意发表声明第120页

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