| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略词表 | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 人NKG2D基因胞外区的克隆与原核表达及其单克隆抗体的制备 | 第14-38页 |
| 一、材料 | 第14-20页 |
| (一) 细胞系 | 第14页 |
| (二) 实验动物 | 第14页 |
| (三) 工具酶及试剂 | 第14-15页 |
| (四) 菌株与质粒载体 | 第15-17页 |
| (五) 仪器设备 | 第17页 |
| (六) 溶液配制 | 第17-19页 |
| (七) 引物 | 第19-20页 |
| 二、方法 | 第20-30页 |
| (一) 人NKG2D分子胞外区基因的克隆和鉴定 | 第20-24页 |
| (二) 人重组NKG2D分子胞外区的原核表达 | 第24-27页 |
| (三) 杂交瘤技术制备rhNKG2D的单克隆抗体 | 第27-30页 |
| 三、结果 | 第30-34页 |
| (一) 人NKG2D分子胞外区基因的克隆和鉴定 | 第30-31页 |
| (二) 人重组NKG2D分子胞外区的原核表达 | 第31-33页 |
| (三) 杂交瘤技术制备rhNKG2D的单克隆抗体 | 第33-34页 |
| 四、讨论 | 第34-38页 |
| 第二部分 MICA-NKG2D相互作用活化γδ细胞的机制研究 | 第38-69页 |
| 一、材料 | 第38-41页 |
| (一) 细胞系 | 第38页 |
| (二) 肿瘤组织标本 | 第38-39页 |
| (三) 主要试剂及抗体 | 第39页 |
| (四) 菌株与质粒载体 | 第39-40页 |
| (五) 仪器设备 | 第40页 |
| (六) 引物 | 第40-41页 |
| (七) 主要溶液配制 | 第41页 |
| 二、方法 | 第41-49页 |
| (一) 重组蛋白MICAα123的原核细胞表达及纯化 | 第41页 |
| (二) 外周血中γδT细胞的体外扩增及培养 | 第41-42页 |
| (三) 来源卵巢癌组织的Vδ1 TIL的体外扩增及培养 | 第42-43页 |
| (四) 表达不同形式MICA分子的基因克隆及真核细胞转染 | 第43-48页 |
| (五) 抗体封闭实验及细胞杀伤活性测定 | 第48页 |
| (六) 人类免疫重建裸鼠的抑瘤实验 | 第48-49页 |
| 三、结果 | 第49-64页 |
| (一) 重组MICAα123蛋白的原核表达及纯化 | 第49-50页 |
| (二) 人PBMC和TIL中的γδT细胞的体外扩增及纯度鉴定 | 第50-52页 |
| (三) 不同形式MICA基因的克隆和鉴定 | 第52-55页 |
| (四) 不同形式MICA分子和eGFP融合蛋白的真核表达和鉴定 | 第55-58页 |
| (五) γδT细胞对MICA~+细胞的体外细胞毒活性 | 第58-62页 |
| (六) 免疫重建裸鼠的抑瘤活性 | 第62-64页 |
| 四、讨论 | 第64-69页 |
| (一) γδTCR识别抗原的特性 | 第64-65页 |
| (二) MICA-NKG2D在γδT细胞的活化和效应中发挥的生物学作用 | 第65-66页 |
| (三) MICA分子表达形式的多样化及其生物学意义 | 第66-68页 |
| (四) 免疫重建裸鼠的抑瘤实验 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-71页 |
| 综述 | 第71-85页 |
| 附录 | 第85-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 个人简历 | 第97页 |
