| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1．1 前言 | 第11-12页 |
| 1．2 微生物活性检测方法概述 | 第12-18页 |
| 1．2．1 基于细胞代谢活性的检测方法 | 第13-16页 |
| 1．2．1．1 细胞培养法 | 第13页 |
| 1．2．1．2 ATP生物发光检测法 | 第13-14页 |
| 1．2．1．3 直接计数法(direct viable count，DVC) | 第14-15页 |
| 1．2．1．4 阻抗微生物检测法 | 第15-16页 |
| 1．2．2 基于细胞完成性的检测方法 | 第16页 |
| 1．2．2．1 膜完整性 | 第16页 |
| 1．2．2．2 流式细胞计数仪(Flow Cytometry) | 第16页 |
| 1．2．3 基于细胞内核酸分子的检测方法 | 第16-18页 |
| 1．2．3．1 荧光原位杂交 | 第16-17页 |
| 1．2．3．2 核酸扩增法 | 第17-18页 |
| 1．3 微型生物分析系统及芯片实验室 | 第18-21页 |
| 1．3．1 样品的处理 | 第18-19页 |
| 1．3．2 信号的检测 | 第19-20页 |
| 1．3．2．1 光学生物传感器 | 第19-20页 |
| 1．3．2．2 物质敏感行生物传感器 | 第20页 |
| 1．3．2．3 电化学生物传感器 | 第20页 |
| 1．3．3 微全分析系统与芯片实验室 | 第20-21页 |
| 1．4 用微分析方法或系统进行细胞活性检测的研究进展 | 第21-23页 |
| 1．5 本文的研究思路 | 第23-25页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第25-33页 |
| 2．1 菌种与培养基 | 第25页 |
| 2．2 试剂与器材 | 第25-28页 |
| 2．2．1 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2．2．2 主要器材 | 第26页 |
| 2．2．3 所用溶液与缓冲液配方 | 第26-28页 |
| 2．3 实验操作及分析方法 | 第28-33页 |
| 2．3．1 大肠杆菌培养条件 | 第28页 |
| 2．3．2 大肠杆菌生长的测定 | 第28页 |
| 2．3．2．1 光密度法 | 第28页 |
| 2．3．2．2 平板计数法 | 第28页 |
| 2．3．3 大肠杆菌的热激条件 | 第28-29页 |
| 2．3．4 mRNA的提取与分离 | 第29-30页 |
| 2．3．4．1 菌体总RNA的提取 | 第29页 |
| 2．3．4．2 GroEL mRNA的特异性磁性分离 | 第29页 |
| 2．3．4．3 菌体总RNA的测定 | 第29-30页 |
| 2．3．5 GroEL mRNA的RT-PCR扩增及电泳检测 | 第30-31页 |
| 2．3．5．1 RT-PCR扩增条件 | 第30页 |
| 2．3．5．2 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第30-31页 |
| 2．3．5．3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第31页 |
| 2．3．5．4 基于凝胶电泳的半定量RT-PCR产物分析 | 第31页 |
| 2．3．6 RT-PCR产物的电化学分析 | 第31-33页 |
| 2．3．6．1 氧化铟锡(Indium Tin Oxide，ITO)电极的清洁 | 第31页 |
| 2．3．6．2 吡咯与吡咯-寡核苷酸的聚合 | 第31页 |
| 2．3．6．3 RT-PCR产物的杂交与金纳米颗粒的结合 | 第31-32页 |
| 2．3．6．4 信号的电化学测量 | 第32-33页 |
| 第3章 大肠杆菌细胞活性的表征 | 第33-43页 |
| 3．1 细胞活性指示物的选定 | 第33-34页 |
| 3．2 GroEL mRNA对细胞活性表征的特异性 | 第34-35页 |
| 3．3 GroEL mRNA在活细胞中转录的稳定性 | 第35-37页 |
| 3．4 热激条件对细胞内GroEL mRNA含量的操纵性 | 第37-42页 |
| 3．4．1 热激温度的影响 | 第37-38页 |
| 3．4．2 热激持续时间的影响 | 第38-39页 |
| 3．4．3 热激响应体积的影响 | 第39页 |
| 3．4．4 脉冲式热激的影响 | 第39-42页 |
| 3．5 本章小结 | 第42-43页 |
| 第4章 用链亲和素修饰的磁性颗粒特异性分离GroEL mRNA的研究 | 第43-52页 |
| 4．1 分离策略的确定 | 第43-45页 |
| 4．2 用链亲和素修饰的磁性颗粒分离GroEL mRNA的效果评价 | 第45-48页 |
| 4．2．1 大肠杆菌细胞的裂解与GroEL mRNA分子的保护 | 第45页 |
| 4．2．2 分离的特异性 | 第45-46页 |
| 4．2．3 分离纯度与得率 | 第46-47页 |
| 4．2．4 分离的可重复性 | 第47-48页 |
| 4．3 GroEL mRNA磁性分离过程优化 | 第48-51页 |
| 4．3．1 GroEL mRNA分子的直接捕获与间接捕获的比较 | 第48-50页 |
| 4．3．2 DNA污染的消除 | 第50-51页 |
| 4．4 本章小结 | 第51-52页 |
| 第5章 GroEL mRNA作为大肠杆菌细胞活性标志物信号的放大与检测 | 第52-60页 |
| 5．1 RT-PCR对GroEL mRNA的扩增的必要性及其与微系统的兼容性 | 第52-53页 |
| 5．2 电化学检测的优越性 | 第53-59页 |
| 5．2．1 基于Ag／Au催化反应的电化学检测及其微系统兼容性 | 第53-58页 |
| 5．2．1．1 用于电化学检测的ITO电极玻璃芯片 | 第53-54页 |
| 5．2．1．2 检测探针在电极表面的电化学共聚反应固定 | 第54-55页 |
| 5．2．1．3 杂交后Ag／Au催化反应信号的电化学检测 | 第55-58页 |
| 5．2．2 电化学检测与凝胶电泳检测的比较 | 第58-59页 |
| 5．3 本章小结 | 第59-60页 |
| 第6章 结论与展望 | 第60-63页 |
| 6．1 结论 | 第60-61页 |
| 6．2 创新点 | 第61页 |
| 6．3 展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 图表索引 | 第68-70页 |
| 硕士就读期间成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
