| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| ·VNN的国内外研究现状 | 第11-21页 |
| ·VNN的发现及危害 | 第11-13页 |
| ·VNN的病理学变化 | 第13-14页 |
| ·NNV的种类和地理分布 | 第14-15页 |
| ·易感水生动物 | 第15-16页 |
| ·传播途径 | 第16-17页 |
| ·NNV的理化特性 | 第17页 |
| ·NNV的分子生物学 | 第17-18页 |
| ·检测NNV感染的诊断方法 | 第18-20页 |
| ·VNN的免疫预防研究 | 第20-21页 |
| ·杆状病毒表达系统 | 第21-24页 |
| ·杆状病毒的生物学特性 | 第21-22页 |
| ·杆状病毒表达体系的应用 | 第22-24页 |
| ·研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 6株鱼类神经坏死病病毒(NNV)CP基因的分子特征和遗传发生分析 | 第25-36页 |
| ·材料与方法 | 第25-30页 |
| ·病毒、载体和细胞 | 第25-26页 |
| ·主要试剂与溶液配制 | 第26-27页 |
| ·质粒抽提溶液配制 | 第27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·NNV cp基因的RT-PCR扩增 | 第28页 |
| ·RT-PCR扩增产物的回收 | 第28页 |
| ·连接反应 | 第28页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的转化 | 第29页 |
| ·pMD18-cp质粒小量提取 | 第29页 |
| ·酶切鉴定 | 第29页 |
| ·序列测定和分析 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-34页 |
| ·RT-PCR扩增结果 | 第30页 |
| ·pMD18-cp克隆载体的酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·cp基因的核苷酸序列及与推导的氨基酸序列比较 | 第31页 |
| ·NNV衣壳蛋白cp基因限制性内切酶位点分析 | 第31页 |
| ·6株NNV分离株cp基因序列与国内外毒株RNA2序列比较分析 | 第31-33页 |
| ·NNV分离株推导的氨基酸序列分析 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 鱼类神经坏死病病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其特性研究 | 第36-53页 |
| ·材料与方法 | 第36-46页 |
| ·质粒、载体和细胞 | 第36-37页 |
| ·主要试剂与溶液配制 | 第37-38页 |
| ·穿梭载体Bacmid的提取液 | 第38页 |
| ·空斑试验试剂配制 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE,Western-blotting的相关试剂 | 第38-39页 |
| ·ELISA的相关试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| ·构建重组杆状病毒操作流程示意图 | 第40页 |
| ·大肠杆菌DH10Bac感受态细胞的制备 | 第40-41页 |
| ·供体质粒pFastBac-cp的构建 | 第41页 |
| ·重组穿梭载体Bacmid-cp的构建 | 第41页 |
| ·重组Bacmid-cp的提取 | 第41-42页 |
| ·Sf9的细胞活化与冻存 | 第42页 |
| ·脂质体介导转染Sf9细胞 | 第42-43页 |
| ·重组杆状病毒AcNPV-cp的感染 | 第43页 |
| ·空斑实验 | 第43页 |
| ·表达产物的SDS-聚丙烯酰胺电泳 | 第43-44页 |
| ·表达产物的Western-blotting检测 | 第44-45页 |
| ·体外表达cp蛋白的粗纯化 | 第45页 |
| ·间接ELISA检测AcNPV-cp表达的外源蛋白 | 第45页 |
| ·NNV cp蛋白负染与电镜观察 | 第45页 |
| ·感染AcNPV-cp的Sf9细胞切片 | 第45-46页 |
| ·结果和分析 | 第46-51页 |
| ·供体质粒pFastBac-cp的构建 | 第46-47页 |
| ·穿梭载体Bacmid-cp的构建 | 第47-48页 |
| ·重组杆状病毒AcNPV-cp的获得 | 第48页 |
| ·重组病毒滴度测定 | 第48页 |
| ·体外表达蛋白SDS-PAGE分析 | 第48-49页 |
| ·体外表达蛋白的Western blotting鉴定 | 第49-50页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第50页 |
| ·NNV cp蛋白负染与电镜观察 | 第50页 |
| ·感染AcNPV-cp的Sf9细胞切片 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 硕士期间研究成果 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
