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水稻胚胎发生相关基因的表达及其功能鉴定

摘要第1-13页
ABSTRACT第13-16页
1 前言第16-45页
   ·胚胎发生过程概述第16-29页
     ·胚胎的早期发育过程第16-18页
     ·胚胎发育过程中的极性轴建立第18-21页
       ·顶-基轴的模式建成第19-20页
       ·其它对称模式的建成第20-21页
     ·顶端分生组织的形成与发育第21-29页
       ·茎端分生组织的形成及发育第22-26页
         ·茎端分生组织的形成及分类第22-23页
         ·双子叶植物茎端分生组织发育的调控第23-24页
         ·单子叶植物茎端分生组织发育的调控第24-26页
       ·根端分生组织的形成及发育第26-29页
   ·WOX 基因家族成员在胚胎发生过程中的作用第29-44页
     ·WOX 类基因的发现及序列特征第29-30页
     ·WOX 类蛋白间的进化关系第30-31页
     ·WOX 基因在胚胎发生过程中的作用第31-41页
       ·WOX 基因在胚胎发育早期中的作用第32-34页
       ·WOX 基因在早期胚胎发生过程中对极性轴建立的作用第34-36页
       ·WOX 基因在胚胎发生过程中对区域建成的作用第36-37页
       ·WOX 基因对顶端分生组织及其侧生器官发生的作用第37-41页
         ·WOX 基因在茎端分生组织发生及侧生器官形成中的作用第38-39页
         ·WOX 基因在根端分生组织发生中的作用第39-41页
     ·WOX 类转录因子与其它基因间的互作关系第41-44页
       ·分生组织形成及干细胞的维持第41-43页
       ·拟南芥胚胎区域建成中WOX9 与MP 和BDL 基因的关系第43-44页
   ·本研究的目的和意义第44-45页
2 材料与方法第45-58页
   ·植物材料及其生长条件第45页
   ·菌株与载体第45页
   ·酶及生化试剂第45页
   ·目的基因的获得及表达分析第45-47页
     ·目的基因的获得第45-46页
     ·目的基因的表达分析第46-47页
   ·农杆菌介导的水稻遗传转化第47-49页
     ·水稻成熟胚盾片愈伤组织的培养第47页
     ·愈伤组织的预培养及农杆菌的活化第47页
     ·农杆菌对水稻愈伤组织的转化第47-49页
   ·定量PCR第49页
   ·组织切片第49-50页
     ·取材固定第49页
     ·脱水、透明、浸蜡、包埋第49页
     ·切片第49页
     ·Toludine Blue O(TBO)染色第49-50页
   ·原位杂交第50-55页
     ·材料的固定第50页
     ·材料的包埋第50-51页
     ·切片第51页
     ·探针标记第51-55页
       ·探针模板的制备第51页
       ·探针模板线性化第51页
       ·转录反应第51-52页
       ·探针半定量第52-53页
       ·脱蜡、消化、乙酰化和杂交第53-54页
       ·洗片第54页
       ·检测第54-55页
   ·亚细胞定位及GFP 观察第55-56页
     ·材料准备第55页
     ·基因枪微弹的准备第55-56页
     ·基因枪转化洋葱表皮第56页
   ·GUS 染色第56-57页
   ·Tail-PCR 分析第57-58页
3 结果与分析第58-85页
   ·水稻胚胎发育相关基因的表达分析第58-64页
     ·水稻胚胎发育相关基因的时空表达模式第58-62页
     ·水稻胚胎发生相关基因的表达对生长素的响应第62-64页
   ·WOX 类转录因子的分离与转基因材料的获得第64-69页
     ·WOX 类基因的克隆与序列分析第64-68页
     ·遗传转化材料的获得第68-69页
       ·过表达转化载体的构建第68页
       ·抑制表达载体的构建第68页
       ·农杆菌介导的遗传转化第68-69页
   ·转基因材料分析与WOX 类转录因子的功能研究第69-85页
     ·OsWOX2 基因在水稻叶片、分蘖和花发育方面的功能研究第69-81页
       ·OsWOX2 基因的时空表达模式第69-70页
       ·转pOsWOX2::GUS 载体植株GUS 染色分析第70-73页
       ·OsWOX2 的亚细胞定位第73页
       ·OsWOX2 基因抑制表达载体转基因材料分析第73-80页
         ·转基因植株生长势、叶片形态及分蘖的变化第74-77页
         ·转基因植株花器官的发育第77-78页
         ·转基因植株的RT-PCR 分析第78-79页
         ·转基因植株的Tail-PCR 分析第79-80页
       ·OsWOX2 基因过表达载体转基因材料分析第80-81页
     ·其它OsWOX 基因的表达及转基因材料表型观察第81-85页
4 讨论第85-93页
   ·胚胎发生相关基因的表达在不同物种间存在一定的差异第85-89页
     ·水稻胚胎发生相关基因与不同物种同源基因的表达差异第85-86页
     ·水稻WUS-related homeobox 基因与其它物种同源基因间的表达差异第86-89页
   ·WOX 基因家族在被子植物类群中是一类古老的分枝第89-90页
   ·水稻OsWOX2 基因在水稻发育过程中起重要作用第90-93页
5 结论第93-94页
参考文献第94-111页
附录1:部分实验操作流程第111-126页
致谢第126-127页
攻读学位期间发表的论文第127页

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