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玉米根系蛋白磷酸酶基因ZmPP2C功能分析及遗传转化研究

英文缩写符号及中英文对照表第1-11页
中文摘要第11-14页
ABSTRACT第14-18页
1 引言第18-34页
   ·逆境胁迫与植物细胞信号转导第18-24页
     ·细胞信号转导系统第19页
     ·细胞信号转导途径第19-24页
   ·蛋白磷酸酶的研究第24-33页
     ·蛋白磷酸酶的发现第24-25页
     ·蛋白磷酸酶的分类、结构及生化特性第25-27页
     ·植物细胞内PP2C 的调控第27-28页
     ·植物PP2C 的生理功能第28-33页
   ·本课题研究的目的及意义第33-34页
2 材料和方法第34-65页
   ·实验材料第34页
   ·菌株与质粒第34页
   ·PCR 引物第34-35页
   ·培养基第35-39页
     ·母液配制第35-38页
     ·培养基类型第38-39页
   ·实验方法第39-65页
     ·植物基因组DNA 提取第39-41页
     ·植物材料总RNA 的提取第41-43页
     ·提取的DNA(RNA)的浓度检测第43页
     ·反转录cDNA 第一链的合成第43-44页
     ·PCR 扩增第44-45页
     ·连接反应第45页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第45页
     ·大肠杆菌感受态细胞的转化第45-46页
     ·碱法小量质粒 DNA 的提取第46-47页
     ·DNA 序列测定第47页
     ·Northern 杂交分析第47-51页
     ·原核表达玉米根系蛋白磷酸酶ZmPP2C 蛋白第51-55页
     ·Western blot 检测蛋白表达第55-56页
     ·pBI121-Zm PP2C-GFP 表达载体的构建第56页
     ·拟南芥的无土栽培、转化及分析第56-59页
     ·野生型与转基因拟南芥植株在培养基上萌发及生长情况第59页
     ·ZmPP2C 基因转拟南芥正义表达载体的构建第59页
     ·电泳目的基因片段的回收第59-60页
     ·根癌农杆菌LBA4404 感受态细胞的制备及转化第60-61页
     ·拟南芥生理指标的测定第61-63页
     ·农杆菌介导法转化玉米的研究第63-65页
3 结果与分析第65-94页
   ·玉米ZmPP2C 与其他植物中的PP2C 类蛋白同源性比较第65-68页
   ·ZmPP2C 在玉米中的表达分析第68页
   ·ZmPP2C 的跨膜结构分析第68-69页
   ·ZmPP2C 的亚细胞定位第69-70页
   ·ZmPP2C 的原核表达及抗体制备第70-73页
     ·原核表达载体的构建第70-72页
     ·目的蛋白的表达第72-73页
     ·目的蛋白的纯化、免疫及效价第73页
   ·ZmPP2C 转化拟南芥研究第73-75页
     ·ZmPP2C 基因的扩增第73-74页
     ·克隆载体和表达载体的构建第74-75页
   ·转基因拟南芥筛选第75-78页
     ·转基因拟南芥的PCR 检测第76页
     ·转基因拟南芥的半定量RT-PCR 鉴定第76-77页
     ·转基因拟南芥的Western blot 鉴定第77-78页
   ·转基因和野生型拟南芥在萌发和根伸长过程中对高盐和干旱的响应第78-80页
   ·转基因和野生型拟南芥在逆境胁迫条件下生理指标的变化第80-82页
     ·转基因和野生型拟南芥净光合速率的变化第80页
     ·转基因和野生型拟南芥脯氨酸含量的变化第80-81页
     ·转基因和野生型拟南芥MDA 含量的变化第81页
     ·转基因和野生型拟南芥相对电导率(RMP)的变化第81页
     ·转基因和野生型拟南芥失水速率的变化第81-82页
   ·转基因和野生型拟南芥胁迫相关基因的表达分析第82-83页
   ·转基因和野生型拟南芥在萌发和根生长过程中对ABA 的响应第83-85页
   ·农杆菌介导的ZmPP2C 转化玉米的研究第85-94页
     ·建立农杆菌介导的玉米遗传转化体系第85-91页
     ·ZmPP2C 基因转化玉米第91-93页
     ·过量表达ZmPP2C 的玉米抗旱分析第93-94页
4 讨论第94-99页
   ·ZmPP2C 基因参与植物的逆境信号转导第94-95页
   ·玉米ZmPP2C 基因表达模式和调控作用第95-96页
   ·过量表达ZmPP2C 基因对转基因拟南芥抗逆性的影响第96-97页
   ·玉米ZmPP2C 基因可能的信号转导机制第97-99页
5 结论第99-100页
参考文献第100-120页
致谢第120-121页
攻读学位期间发表论文情况第121-122页
附图第122页

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