| 中文摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-5页 |
| 中文文摘 | 第5-13页 |
| 绪论 | 第13-37页 |
| 第一节 植物寄生性线虫的生物防治 | 第14-22页 |
| ·食线虫细菌的研究概况 | 第15-18页 |
| ·食线虫微生物的胞外酶 | 第18-22页 |
| 第二节 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第22-27页 |
| ·枯草杆菌表达系统特点 | 第23页 |
| ·芽孢杆菌表达系统中的载体 | 第23-26页 |
| ·枯草杆菌的分泌表达系统 | 第26-27页 |
| 第三节 蛋白酶的定向分子进化 | 第27-36页 |
| ·分子定向进化文库的构建 | 第28-32页 |
| ·分子定向进化文库的筛选 | 第32-34页 |
| ·分子定向进化的应用 | 第34-36页 |
| 第四节 课题的研究内容与意义 | 第36-37页 |
| ·课题研究内容 | 第36页 |
| ·课题研究的目的与意义 | 第36-37页 |
| 第一章 侧孢短芽孢杆菌G4的高密度培养 | 第37-61页 |
| 第一节 材料与方法 | 第37-44页 |
| ·材料 | 第37-39页 |
| ·实验方法 | 第39-44页 |
| 第二节 结果与分析 | 第44-59页 |
| ·16S rDNA基因的扩增与鉴定 | 第44-45页 |
| ·16S rDNA基因的同源性分析 | 第45-46页 |
| ·蛋白酶BLG4活力的分析 | 第46-47页 |
| ·单因素试验优化 | 第47页 |
| ·Plackett—Burman试验设计 | 第47-50页 |
| ·响应面Box-Behnken试验设计优化 | 第50-58页 |
| ·最优发酵配方组合的验证 | 第58-59页 |
| 第三节 小结与讨论 | 第59-61页 |
| 第二章 芽孢杆菌高效电转体系的建立 | 第61-75页 |
| 第一节 材料与方法 | 第61-66页 |
| ·材料 | 第61-63页 |
| ·实验方法 | 第63-66页 |
| 第二节 结果与分析 | 第66-72页 |
| ·芽孢杆菌的生长曲线 | 第66页 |
| ·芽孢杆菌的抗生素敏感性分析 | 第66-67页 |
| ·质粒pSG1729的鉴定 | 第67-68页 |
| ·细胞生长时间对电转化率的影响 | 第68-69页 |
| ·恢复培养基对电转化率的影响 | 第69-70页 |
| ·生长培养基对电转化率的影响 | 第70页 |
| ·电场强度对电转化率的影响 | 第70-71页 |
| ·电击缓冲液对电转化率的影响 | 第71-72页 |
| ·电转化参数的确定 | 第72页 |
| 第三节 小结与讨论 | 第72-75页 |
| 第三章 丝氨酸蛋白酶BLG4的异源表达 | 第75-91页 |
| 第一节 材料与方法 | 第75-79页 |
| ·材料 | 第75-76页 |
| ·实验方法 | 第76-79页 |
| 第二节 结果与分析 | 第79-87页 |
| ·蛋白酶BLG4基因的扩增 | 第79-80页 |
| ·重组子pMDS-APR的构建 | 第80-82页 |
| ·表达重组质粒的构建与鉴定 | 第82-84页 |
| ·枯草杆菌转化子的鉴定 | 第84-85页 |
| ·枯草杆菌转化子蛋白酶活性分析 | 第85-87页 |
| ·枯草杆菌转化子发醉上清的SDS-PAGE分析 | 第87页 |
| 第三节 小结与讨论 | 第87-91页 |
| 第四章 蛋白酶BLG4随机突变文库的构建 | 第91-107页 |
| 第一节 材料与方法 | 第91-95页 |
| ·材料 | 第91-92页 |
| ·实验方法 | 第92-95页 |
| 第二节 结果与分析 | 第95-104页 |
| ·蛋白酶BLG4前肤和终止子的扩增 | 第95页 |
| ·蛋白酶BLG4成熟肽的易错PCR | 第95-96页 |
| ·蛋白酶BLG4成熟肤易错PCR突变率的分析 | 第96-98页 |
| ·蛋白酶BLG4融合PCR体系的建立 | 第98-100页 |
| ·蛋白酶BLG4突变文库的构建与验证 | 第100-101页 |
| ·蛋白酶BLG4基因随机突变文库的分析 | 第101页 |
| ·蛋白酶BLG4突变子的测序分析 | 第101-104页 |
| 第三节 小结与讨论 | 第104-107页 |
| 第五章 蛋白酶BLG4突变子筛选及其生物信息学分析 | 第107-121页 |
| 第一节 材料与方法 | 第107-109页 |
| ·材料 | 第107页 |
| ·实验方法 | 第107-109页 |
| 第二节 结果与分析 | 第109-120页 |
| ·蛋白酶BLG4随机突变表达文库的构建 | 第109-110页 |
| ·蛋白酶BLG4随机突变表达文库的筛选 | 第110页 |
| ·突变体Mut-01的基因测序与分析 | 第110页 |
| ·体壁降解蛋白的氨基酸序列比对分析 | 第110-112页 |
| ·蛋白酶BLG4的信号肽预测分析 | 第112页 |
| ·突变体Mut-01的理化表征分析 | 第112-114页 |
| ·突变体Mut-01的疏水性和跨膜分析 | 第114-115页 |
| ·蛋白酶BLG4蛋白质活性结构域预测 | 第115页 |
| ·突变体Mut-01的同源模建分析 | 第115-118页 |
| ·突变体Mut-01热稳定性提高的分子基础 | 第118-120页 |
| 第三节 小结与讨论 | 第120-121页 |
| 结论 | 第121-123页 |
| 附录 主要符号缩略表 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-139页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第139-141页 |
| 致谢 | 第141-143页 |
| 个人简历 | 第143页 |