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AVM诱导王鸽脑神经细胞凋亡的内质网通路研究

摘要第1-14页
ABSTRACT第14-16页
1 引言第16-26页
   ·AVM 的概况与毒性作用第16-17页
   ·AVM 与神经细胞凋亡第17-18页
   ·细胞凋亡的形态学与生物化学特征的改变第18页
   ·细胞凋亡的线粒体调控机制的研究进展第18-19页
   ·细胞凋亡的内质网调控机制的研究进展第19-24页
     ·细胞凋亡途径中线粒体与内质网途径的关系第21页
     ·Caspase-12 的活化与内质网应激介导的细胞凋亡第21-22页
     ·GRP78 与内质网应激介导的细胞凋亡第22页
     ·GADD153 与内质网应激介导的细胞凋亡第22-23页
     ·Bcl-2 家族成员与内质网应激介导的细胞凋亡第23-24页
     ·钙离子与内质网应激介导的细胞凋亡第24页
   ·细胞凋亡的死亡受体调控机制的研究进展第24-25页
   ·氧化应激与内质网应激介导的细胞凋亡第25页
   ·试验的目的与意义第25-26页
2 材料与方法第26-34页
   ·主要仪器与材料第26-27页
     ·主要仪器第26页
     ·主要试剂第26-27页
   ·试验材料第27页
   ·王鸽脑神经细胞原代分离培养、纯化及处理第27-28页
     ·神经细胞原代分离培养、纯化第27页
     ·神经细胞的鉴定第27-28页
     ·分离纯化的神经细胞的处理第28页
   ·染AVM 细胞内质网超微结构的观察第28页
   ·AVM 致神经细胞凋亡的检测第28-29页
     ·MTT 法检测细胞活性第28-29页
     ·AVM 对神经细胞凋亡指数的检测第29页
   ·染AVM 细胞氧化还原指标的检测第29-30页
     ·谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的检测第29页
     ·细胞内活性氧(ROS)水平的检测第29页
     ·超氧化物歧化酶(SOD)活性的检测第29-30页
   ·半定量 RT-PCR 测定神经细胞 Bcl-2、GADD153、GRP78 和 Cyt-c mRNA 的表达第30-31页
     ·引物的设计与合成第30页
     ·神经细胞总RNA 的提取第30页
     ·反转录反应第30-31页
     ·基因的PCR 扩增及最佳PCR 反应条件的摸索及序列测定与分析第31页
     ·PCR 产物的分析第31页
   ·荧光定量 PCR 检测 Caspase-12mRNA 表达水平第31-33页
     ·引物的设计与合成第31-32页
     ·Real Time PCR 反应体系的优化第32页
     ·标准曲线的构建及特异性检测第32页
     ·Real Time PCR 检测第32-33页
   ·试验数据分析与统计第33-34页
3 试验结果分析第34-63页
   ·培养不同时期的神经细胞的形态学观察结果第34-35页
   ·神经细胞的鉴定结果第35页
   ·神经细胞内质网结构的观察第35-36页
   ·神经细胞凋亡的检测第36-41页
     ·MTT 法检测细胞活性检测结果第36-37页
     ·AVM 对神经细胞凋亡指数的影响结果第37-41页
   ·染AVM 细胞氧化还原指标的检测结果第41-45页
     ·谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的检测结果第41-42页
     ·细胞内活性氧(ROS)水平的检测结果第42-43页
     ·超氧化物歧化酶(SOD)活性的检测结果第43-45页
   ·半定量 RT-PCR 测定神经细胞 Bcl-2、GRP78、GADD153 和 Cyt-c mRNA 的表达第45-56页
     ·神经细胞总RNA 的提取结果第45页
     ·基因的 PCR 扩增及最佳 PCR 反应条件的摸索结果第45-46页
     ·PCR 产物的分析第46-56页
   ·荧光定量 PCR 检测 Caspase-12RNA 表达水平第56-63页
4 讨论第63-71页
   ·关于王鸽神经细胞分离、纯化培养技术的改进第63-64页
   ·关于AVM 致细胞凋亡的检测结果第64-66页
     ·神经细胞凋亡的形态学观察第64-65页
     ·四唑盐比色法(MTT 法)检测细胞存活率第65页
     ·原位末端标记法(TUNEL 法)检测细胞凋亡第65-66页
   ·AVM 对神经细胞的内质网形态学影响第66页
   ·氧化应激对AVM 致神经细胞凋亡的影响第66-67页
   ·AVM 对神经细胞 GRP78mRNA 表达的影响第67-68页
   ·AVM 对神经细胞 Cyt-c mRNA 表达的影响第68页
   ·AVM 对神经细胞 Bcl-2 mRNA 表达的影响第68-69页
   ·AVM 对神经细胞 GADD153 mRNA 表达的影响第69-70页
   ·AVM 对神经细胞 Caspase-12 mRNA 表达的影响第70-71页
5 结论第71-72页
致谢第72-73页
参考文献第73-79页
攻读硕士期间发表的学术论文第79页

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