| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-48页 |
| ·植物离体器官发生 | 第13-17页 |
| ·早期的离体再生实验 | 第13页 |
| ·植物细胞全能性 | 第13-15页 |
| ·再生的模式建成 | 第15页 |
| ·再生过程中激素的作用 | 第15-17页 |
| ·干细胞和分生组织的形成 | 第17-25页 |
| ·干细胞的生物学特征 | 第18页 |
| ·胚胎中干细胞的形成 | 第18-19页 |
| ·分生组织的形成 | 第19-21页 |
| ·根端和苗端分生组织干细胞维持的不同点 | 第19-20页 |
| ·根端和苗端分生组织中干细胞维持的相同点 | 第20-21页 |
| ·分生组织与器官形成 | 第21-23页 |
| ·植物与动物干细胞比较 | 第23-25页 |
| ·细胞分裂素 | 第25-31页 |
| ·细胞分裂素的合成和代谢 | 第25-27页 |
| ·结构和分类 | 第25页 |
| ·生物合成 | 第25-26页 |
| ·细胞分裂素的降解 | 第26-27页 |
| ·细胞分裂素的运输 | 第27页 |
| ·细胞分裂素信号转导 | 第27-31页 |
| ·信号转导中的受体 | 第28-29页 |
| ·信号转导中的磷酸转运蛋白AHP 和反应调节因子ARR | 第29-31页 |
| ·生长素与植物发育 | 第31-43页 |
| ·生长素的分布模式 | 第32-33页 |
| ·生长素的生物合成 | 第33-34页 |
| ·生长素的运输 | 第34-36页 |
| ·PINs 控制生长素流动的方向 | 第36页 |
| ·生长素的自我调节 | 第36-40页 |
| ·生长素不依赖于TIR1 调节PIN 的分布 | 第37-38页 |
| ·生长素依赖于TIR1 调节PIN 的定位 | 第38-40页 |
| ·生长素信号转导 | 第40-43页 |
| ·生长素和细胞分裂素的相互作用 | 第43-44页 |
| ·激素与干细胞调控 | 第44-45页 |
| ·本实验的目的意义 | 第45-48页 |
| 2 材料与方法 | 第48-64页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·植物材料及生长条件 | 第48-49页 |
| ·菌株和质粒 | 第49页 |
| ·酶及生化试剂 | 第49页 |
| ·PCR 引物 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-64页 |
| ·拟南芥组织培养 | 第49-50页 |
| ·拟南芥离体再生苗的培养 | 第49-50页 |
| ·表达载体的构建 | 第50-57页 |
| ·植物组织总RNA 的提取 | 第50-51页 |
| ·反转录cDNA 第一链的合成 | 第51页 |
| ·植物基因组DNA 的提取及纯化 | 第51-52页 |
| ·PCR 扩增 | 第52-53页 |
| ·连接反应 | 第53页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备转化及碱法小量质粒DNA 的提取 | 第53页 |
| ·质粒DNA 的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·DNA 序列测定 | 第54页 |
| ·诱导型anti-WUS 表达载体的构建 | 第54-55页 |
| ·诱导型anti-PIN1 表达载体的构建 | 第55页 |
| ·pWUS::GUS 表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·pCLV3::GUS 表达载体的构建 | 第56页 |
| ·pARR5::GUS 表达载体的构建 | 第56-57页 |
| · | 第57-59页 |
| ·根癌农杆菌GV3101 感受态细胞的制备与转化 | 第57页 |
| ·拟南芥的栽培、转化及转基因植株分析 | 第57-59页 |
| ·拟南芥幼苗的萌发与移栽 | 第57-58页 |
| ·拟南芥的转化 | 第58-59页 |
| ·转基因植株的分析 | 第59页 |
| ·半定量RT-PCR 分析 | 第59-60页 |
| ·离体再生苗发育过程中的基因在不同组织中的表达分析 | 第59-60页 |
| ·激素相关的基因在不同组织中的表达分析 | 第60页 |
| ·转基因拟南芥的半定量RT-PCR 分析 | 第60页 |
| ·qRT-PCR 分析 | 第60-61页 |
| ·GUS 染色分析 | 第61页 |
| ·GUS 染色后的石蜡切片 | 第61-62页 |
| ·取材固定 | 第61-62页 |
| ·脱水、透明、浸蜡、包埋 | 第62页 |
| ·钌红染色 | 第62页 |
| ·扫描电镜观察 | 第62-63页 |
| ·共聚焦显微镜观察和图像处理 | 第63-64页 |
| 3 结果与分析 | 第64-88页 |
| ·离体苗的再生与干细胞形成 | 第64-70页 |
| ·拟南芥离体苗再生系统的建立 | 第64-66页 |
| ·苗发育相关基因的表达模式分析 | 第66-67页 |
| ·基因的表达模式 | 第66-67页 |
| ·TFL1 和LFY 的表达模式分析 | 第67页 |
| ·干细胞特征决定相关基因的诱导表达 | 第67-69页 |
| ·离体再生苗的诱导需要WUS 的表达 | 第69-70页 |
| ·离体再生苗诱导过程中建立起细胞分裂素和生长素的区域性分布 | 第70-75页 |
| ·细胞分裂素区域性分布的建立 | 第70-71页 |
| ·生长素区域性分布的建立 | 第71-73页 |
| ·单一激素诱导条件下细胞分裂素和生长素的分布模式 | 第73-75页 |
| ·PIN 蛋白的定位 | 第75-78页 |
| ·PIN1 蛋白分布与WUS 表达区域重叠 | 第75-77页 |
| ·其它PIN 蛋白的定位 | 第77-78页 |
| ·细胞分裂素决定生长素的区域性分布和WUS 的诱导表达 | 第78-84页 |
| ·生长素的极性运输控制细胞分裂素的区域性分布和WUS 的诱导表达 | 第84-86页 |
| ·生长素极性运输决定了细胞分裂素的区域性分布 | 第84-85页 |
| ·生长素信号转导参与离体再生苗的形成 | 第85-86页 |
| ·离体再生苗过程中细胞分裂与激素分布的相关性 | 第86-88页 |
| 4 讨论 | 第88-93页 |
| ·离体苗再生过程中干细胞组织中心的形成 | 第88页 |
| ·细胞分裂素和生长素区域性分布决定了干细胞的形成 | 第88-89页 |
| ·WUS 的诱导表达需要细胞分裂素和生长素的相互作用 | 第89-91页 |
| ·生长素和细胞分裂素控制干细胞形成的模型 | 第91-93页 |
| 5 结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-117页 |
| 附录 | 第117-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第126页 |
