| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-38页 |
| ·牛结核病概述 | 第16-34页 |
| ·病原特点 | 第16-17页 |
| ·致病机理 | 第17-18页 |
| ·免疫学特点 | 第18-20页 |
| ·牛结核病的流行与控制 | 第20-23页 |
| ·牛结核病流行的影响因素 | 第23页 |
| ·牛结核病诊断方法 | 第23-33页 |
| ·牛结核病综合防制措施 | 第33-34页 |
| ·研究目的与意义 | 第34-36页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第36-37页 |
| ·研究内容 | 第36-37页 |
| ·技术路线 | 第37页 |
| ·研究预期结果 | 第37-38页 |
| 第二章 水牛γ-干扰素基因的克隆、成熟蛋白原核表达及其免疫活性鉴定 | 第38-60页 |
| ·引言 | 第38-39页 |
| ·材料与方法 | 第39-51页 |
| ·材料 | 第39-43页 |
| ·外周血淋巴细胞分离培养 | 第43页 |
| ·水牛γ-干扰素基因的克隆与序列分析 | 第43-46页 |
| ·水牛γ-干扰素基因成熟蛋白原核表达载体的构建 | 第46-48页 |
| ·基因工程重组表达菌的诱导表达 | 第48-49页 |
| ·rWBIFN-γ重组蛋白的纯化 | 第49页 |
| ·蛋白质定量 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白的免疫学鉴定 | 第50-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-57页 |
| ·WBIFN-γ基因(含信号肽)的PCR扩增及序列测定 | 第51-53页 |
| ·WBIFN-γ基因成熟蛋白原核表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·基因工程重组菌的诱导表达和SDS-PAGE电泳分析 | 第54-55页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| ·重组蛋白的免疫学鉴定 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| ·水牛γ-干扰素基因的克隆与序列分析 | 第57页 |
| ·水牛γ-干扰素成熟蛋白的原核表达 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-60页 |
| 第三章 水牛重组γ-干扰素单克隆抗体的制备与特性鉴定 | 第60-77页 |
| ·引言 | 第60-61页 |
| ·材料和方法 | 第61-69页 |
| ·材料 | 第61-63页 |
| ·免疫动物 | 第63页 |
| ·间接ELISA筛选方法的建立 | 第63-64页 |
| ·免疫小鼠血清效价测定 | 第64页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第64-66页 |
| ·小鼠单抗腹水的制备 | 第66-67页 |
| ·单抗的纯化 | 第67页 |
| ·单抗生物学特性鉴定 | 第67-69页 |
| ·结果与分析 | 第69-73页 |
| ·水牛γ-干扰素杂交瘤细胞株的建立 | 第69-71页 |
| ·单抗的纯化 | 第71页 |
| ·单抗生物学特性鉴定 | 第71-73页 |
| ·讨论 | 第73-76页 |
| ·抗水牛γ-干扰素单克隆抗体的制备 | 第73-75页 |
| ·抗水牛γ-干扰素单克隆抗体的意义 | 第75-76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 第四章 牛结核分枝杆菌CFP10/ESAT6融合蛋白原核表达及其在牛结核病诊断中的应用 | 第77-91页 |
| ·引言 | 第77-78页 |
| ·材料和方法 | 第78-84页 |
| ·材料 | 第78-79页 |
| ·引物的设计与合成 | 第79-80页 |
| ·结核杆菌培养与DNA提取 | 第80页 |
| ·牛结核杆菌CFP10-ESAT6融合基因的克隆与测序 | 第80-82页 |
| ·牛结核杆菌CFP10-ESAT6融合基因表达载体的构建 | 第82-83页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第83页 |
| ·融合蛋白的纯化及活性鉴定 | 第83页 |
| ·融合蛋白刺激牛全血产生IFN-γ用于牛结核病检测 | 第83-84页 |
| ·结果与分析 | 第84-87页 |
| ·牛结核杆菌CFP10-ESAT6融合基因的PCR扩增 | 第84页 |
| ·PMD-18-T-EC重组质粒的酶切鉴定 | 第84页 |
| ·原核表达质粒的酶切鉴定及测序 | 第84-85页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌BL21中表达 | 第85-86页 |
| ·融合蛋白纯化结果及活性鉴定 | 第86页 |
| ·融合蛋白刺激牛全血产生IFN-γ用于牛结核病检测 | 第86-87页 |
| ·讨论 | 第87-90页 |
| ·关于重组PCR技术 | 第87-88页 |
| ·关于CFP10-ESAT6在牛结核病检测中的应用 | 第88-90页 |
| ·小结 | 第90-91页 |
| 第五章 水牛γ-干扰素夹心ELISA检测方法的初步建立及其在水牛结核病检测中的应用 | 第91-109页 |
| ·引言 | 第91-93页 |
| ·材料与方法 | 第93-98页 |
| ·材料 | 第93-94页 |
| ·单克隆抗体4A11的HRP标记 | 第94页 |
| ·DAS-ELISA方法的建立及条件优化 | 第94-96页 |
| ·夹心ELISA方法与皮内变态反应试验的对比试验 | 第96-98页 |
| ·结果与分析 | 第98-102页 |
| ·酶标抗体效价 | 第98页 |
| ·最适单抗包被浓度的确定 | 第98-99页 |
| ·酶标单抗最佳工作浓度的确定 | 第99页 |
| ·封闭液和抗体稀释液的确定 | 第99-100页 |
| ·阴阳性临界值(Cut off值)的确定 | 第100页 |
| ·灵敏度、特异性、稳定性试验 | 第100-101页 |
| ·夹心ELISA方法与皮内变态反应的对比试验 | 第101-102页 |
| ·讨论 | 第102-107页 |
| ·双抗体夹心ELISA方法条件优化 | 第102-103页 |
| ·牛结核病诊断方法的选择 | 第103-105页 |
| ·广西牛结核病净化防制措施 | 第105-107页 |
| ·小结 | 第107-109页 |
| 第六章 创新点 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 作者简介 | 第120页 |
