毒死蜱降解菌Klebsiella sp. CPK魔斑合成酶基因的鉴定及功能分析
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-31页 |
| ·引言 | 第14页 |
| ·化学农药与环境污染 | 第14-15页 |
| ·毒死蜱应用概况 | 第15页 |
| ·毒死蜱理化性质及环境行为 | 第15-17页 |
| ·毒死蜱微生物降解的研究进展 | 第17-19页 |
| ·魔斑与细菌的严谨反应 | 第19-21页 |
| ·魔斑合成代谢相关的酶 | 第21-23页 |
| ·魔斑调控机制研究进展 | 第23-27页 |
| ·魔斑对细菌生理的影响 | 第27-29页 |
| ·论文设计 | 第29-31页 |
| ·研究的目的意义 | 第29页 |
| ·研究思路 | 第29-31页 |
| 第二章 毒死蜱降解菌的分离、鉴定及降解性能研究 | 第31-45页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·药品及试剂 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·试剂配制 | 第31-32页 |
| ·仪器 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-35页 |
| ·菌株富集驯化与筛选分离 | 第32-33页 |
| ·菌种鉴定及系统发育分析 | 第33-34页 |
| ·菌株生长特性和降解性能 | 第34页 |
| ·毒死蜱降解基因的定位与克隆 | 第34-35页 |
| ·毒死蜱降解酶的特性研究 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-43页 |
| ·毒死蜱降解菌的分离与鉴定 | 第35-36页 |
| ·菌株16SrDNA系统发育分析 | 第36-37页 |
| ·菌株生长特性及降解性能研究 | 第37-40页 |
| ·毒死蜱降解基因的定位与克隆 | 第40-42页 |
| ·毒死蜱降解酶的特性研究 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-45页 |
| 第三章 魔斑合成酶基因的克隆、表达及活性检测 | 第45-61页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·菌株及质粒 | 第45页 |
| ·药品试剂及培养基 | 第45-46页 |
| ·试剂配制 | 第46页 |
| ·仪器 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-51页 |
| ·relA基因克隆 | 第46-48页 |
| ·relA基因表达分析 | 第48-50页 |
| ·魔斑检测 | 第50-51页 |
| ·relA基因功能互补分析 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-60页 |
| ·relA基因克隆 | 第51-53页 |
| ·RelA序列分析及系统发育树构建 | 第53-55页 |
| ·relA基因的诱导表达 | 第55-56页 |
| ·HPLC检测魔斑的生成 | 第56-57页 |
| ·relA基因功能互补分析 | 第57-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第四章 魔斑合成酶基因的敲除及对毒死蜱降解的影响 | 第61-79页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·菌株与质粒 | 第61页 |
| ·药品试剂及培养基 | 第61-62页 |
| ·试剂配制 | 第62页 |
| ·仪器 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-67页 |
| ·四环素抗性基因盒及relA基因扩增 | 第62-63页 |
| ·relA基因敲除载体的构建 | 第63-64页 |
| ·relA基因敲除 | 第64页 |
| ·HPLC检测魔斑 | 第64-65页 |
| ·菌株生长特性分析 | 第65页 |
| ·菌株对毒死蜱的降解 | 第65页 |
| ·RNA提取及半定量RT-PCR | 第65-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-77页 |
| ·relA及Tc基因盒的扩增 | 第67-68页 |
| ·魔斑合成酶基因敲除载体的鉴定 | 第68页 |
| ·魔斑合成酶基因敲除载体的验证 | 第68-69页 |
| ·RT-PCR验证relA基因的敲除 | 第69-71页 |
| ·魔斑生成的检测 | 第71-72页 |
| ·ΔrelA菌株生长特性分析 | 第72-73页 |
| ·relA敲除对毒死蜱降解的影响 | 第73-74页 |
| ·CPK菌株中relA基因表达与毒死蜱降解的关系 | 第74-77页 |
| ·小结 | 第77-79页 |
| 第五章 全文总结 | 第79-82页 |
| ·全文总结 | 第79-80页 |
| ·创新之处 | 第80-81页 |
| ·研究展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 作者简历 | 第94-95页 |
| 附录A 特异蛋白一级质谱PMF | 第95-98页 |
| 附录B 特异蛋白二级质谱Q-TOF | 第98-100页 |
