| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 绪论 | 第10-22页 |
| ·课题背景 | 第10页 |
| ·文献综述 | 第10-19页 |
| ·苏云金芽胞杆菌概述 | 第10-11页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白的结构与功能 | 第11-12页 |
| ·Bt晶体蛋白的杀虫机制 | 第12-14页 |
| ·Bt蛋白基因的分类 | 第14-15页 |
| ·对鳞翅目昆虫有毒的菌株 | 第15-16页 |
| ·Bt杀虫蛋白的应用简史 | 第16-18页 |
| ·转基因植物产业化现状与发展趋势 | 第18-19页 |
| ·研究目的内容 | 第19-22页 |
| ·具体研究内容 | 第19-20页 |
| ·课题研究的具体路线 | 第20-22页 |
| 第一章 cry1Ca基因改造、合成 | 第22-28页 |
| ·材料与方法 | 第22-24页 |
| ·实验材料 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-24页 |
| ·生物信息学软件应用 | 第22页 |
| ·基因两端非编码区序列的设计 | 第22页 |
| ·修饰序列应用 | 第22-23页 |
| ·双终止子使用 | 第23页 |
| ·cry1Ca杀虫基因的人工合成 | 第23-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-25页 |
| ·设计的cry1Ca基因完整序列 | 第24页 |
| ·人工合成cry1Ca基因及原始cry1Ca基因密码子选择偏向比较 | 第24页 |
| ·改造前后两基因碱基GC%含量的变化 | 第24-25页 |
| ·改造前后两基因的比较 | 第25页 |
| ·PGH酶切鉴定结果 | 第25页 |
| ·小结与讨论 | 第25-28页 |
| 第二章 原核表达载体构建和融合蛋白表达、纯化及抗体制备 | 第28-38页 |
| ·材料与方法 | 第28-31页 |
| ·实验材料 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-31页 |
| ·质粒DNA提取 | 第28页 |
| ·制备大肠杆菌DH5a感受态 | 第28页 |
| ·载体构建 | 第28页 |
| ·融合蛋白表达与纯化 | 第28-30页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第28-29页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析 | 第29页 |
| ·包涵体蛋白前处理 | 第29页 |
| ·融合蛋白的纯化、复性 | 第29-30页 |
| ·抗体的制备及酶标记 | 第30-31页 |
| ·抗原的准备 | 第30页 |
| ·兔的免疫 | 第30页 |
| ·抗血清的制备 | 第30页 |
| ·亲和层析法纯化IgG和抗体酶标记 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-36页 |
| ·原核表达载体构建、表达与纯化 | 第31-33页 |
| ·融合蛋白表达载体PET-28bca的构建 | 第31页 |
| ·融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第31-33页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析 | 第32页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| ·抗体的制备及酶标记 | 第33-36页 |
| ·高效价的cry1Ca蛋白兔多抗的制备 | 第33页 |
| ·酶标抗体及浓度的选择 | 第33-34页 |
| ·抗体的特异性 | 第34-36页 |
| ·小结与讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 植物表达载体构建、农杆菌转化和分子检测 | 第38-46页 |
| ·材料与方法 | 第38-40页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-39页 |
| ·载体构建 | 第38页 |
| ·水稻的转化 | 第38页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·农杆菌介导水稻转化 | 第38-39页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第39-40页 |
| ·水稻叶片DNA提取—CTAB法 | 第39页 |
| ·目的基因的PCR检测 | 第39页 |
| ·Southern的探针设计 | 第39-40页 |
| ·Southern blot检测 | 第40页 |
| ·ELISA检测 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-44页 |
| ·植物表达载体PCDMARCA的构建和酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·水稻的转化与检测 | 第41-44页 |
| ·水稻转化苗的获得 | 第41页 |
| ·转化植株的分子检测 | 第41-44页 |
| ·PCR检测T_0代转基因水稻植株 | 第41-42页 |
| ·T_0代转化植株Southern blot检测 | 第42页 |
| ·ELISA检测转基因T_0代水稻蛋白表达 | 第42-44页 |
| ·T_0代转基因植株田间抗虫性 | 第44页 |
| ·小结与讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 结论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-58页 |
| 附录1 | 第58-62页 |
| 附录2 | 第62-64页 |
| 附录3 | 第64-66页 |
| 附录4 | 第66-68页 |
| 附录5 | 第68-72页 |
| 附录6 | 第72-80页 |
| 附录7 | 第80-86页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 个人简历 | 第90-92页 |