| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| ·柑橘采后病害的防治策略研究 | 第11-15页 |
| ·柑橘采后损失情况 | 第11-12页 |
| ·柑橘采后真菌病害的防治措施 | 第12-13页 |
| ·柑橘采后病害的拮抗菌 | 第13-15页 |
| ·采后生防酵母菌的研究进展 | 第15-16页 |
| ·采后生防酵母菌是国内外研究热点 | 第15页 |
| ·生防酵母菌存在的问题 | 第15-16页 |
| ·问题的解决途径 | 第16页 |
| ·微生物菌种改良的方法 | 第16-17页 |
| ·诱变育种 | 第16-17页 |
| ·杂交育种 | 第17页 |
| ·基因工程育种 | 第17页 |
| ·原生质体融合技术在遗传改良中的应用 | 第17-19页 |
| ·原生质体制备和再生过程中的影响因素 | 第18页 |
| ·原生质体融合技术的应用 | 第18-19页 |
| ·基因工程技术在遗传改良中的应用 | 第19-20页 |
| ·课题来源及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-35页 |
| ·试验材料 | 第21-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·供试培养基 | 第21页 |
| ·主要试剂和引物 | 第21-22页 |
| ·试验菌株保存方法 | 第22-23页 |
| ·仪器设备 | 第23页 |
| ·试验方法 | 第23-35页 |
| ·生防酵母菌 34-9 的 rDNA-ITS 分子鉴定 | 第23-27页 |
| ·生防酵母菌 34-9 DNA 提取 | 第23-24页 |
| ·利用通用引物扩增rDNA基因簇ITS全序列 | 第24-25页 |
| ·目的片段回收 | 第25页 |
| ·PCR产物与载体连接 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第26页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第26-27页 |
| ·重组克隆的筛选和测序分析 | 第27页 |
| ·生长曲线测定 | 第27页 |
| ·原生质体融合的方法 | 第27-30页 |
| ·酿酒酵母单倍体化 | 第27-28页 |
| ·原生质体制备 | 第28-29页 |
| ·原生质体再生 | 第29页 |
| ·致死条件的确立 | 第29页 |
| ·原生质体融合 | 第29-30页 |
| ·融合子筛选及鉴定 | 第30页 |
| ·基因工程的方法 | 第30-35页 |
| ·菌株 34-9 对潮霉素B的敏感性检测 | 第30页 |
| ·质粒的提取及鉴定 | 第30-32页 |
| ·根癌农杆菌介导的转化方法 | 第32-33页 |
| ·醋酸锂转化方法 | 第33页 |
| ·电转化方法 | 第33-34页 |
| ·转化子稳定性检测 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-53页 |
| ·生防酵母菌 34-9 的 rDNA-ITS 序列分析 | 第35页 |
| ·利用原生质体融合的方法对菌株 34-9 进行遗传改良 | 第35-48页 |
| ·影响菌株 34-9 原生质体制备率和再生率的因素 | 第35-41页 |
| ·菌株 34-9 的生长曲线 | 第35-36页 |
| ·预处理对菌株 34-9 原生质体制备率和再生率的影响 | 第36页 |
| ·培养时间(菌龄)对菌株 34-9 原生质体制备率和再生率的影响 | 第36-38页 |
| ·酶解液浓度对菌株 34-9 原生质体制备率和再生率的影响 | 第38-39页 |
| ·酶解时间对菌株 34-9 原生质体制备率和再生率的影响 | 第39-40页 |
| ·渗透压稳定剂对菌株 34-9 原生质体制备率和再生率的影响 | 第40-41页 |
| ·影响酿酒酵母原生质体制备率和再生率的因素 | 第41-47页 |
| ·不同产孢培养基对酿酒酵母孢子形成的影响 | 第41-42页 |
| ·酿酒酵母单倍体的生长曲线 | 第42页 |
| ·培养时间(菌龄)对酿酒酵母原生质体制备率和再生率的影响 | 第42-44页 |
| ·酶解液浓度对酿酒酵母原生质体制备率和再生率的影响 | 第44-45页 |
| ·酶解时间对酿酒酵母原生质体制备率和再生率的影响 | 第45-46页 |
| ·渗透压稳定剂对酿酒酵母原生质体制备率和再生率的影响 | 第46-47页 |
| ·亲本致死条件 | 第47页 |
| ·菌株 34-9 的致死条件 | 第47页 |
| ·酿酒酵母的致死条件 | 第47页 |
| ·融合子的获得与筛选 | 第47-48页 |
| ·利用基因工程的方法对菌株 34-9 进行遗传改良 | 第48-53页 |
| ·菌株34-9对潮霉素B的敏感性检测 | 第48-49页 |
| ·质粒 pTFCM-hph 和 pFA6a-GFP(S65T)-hphMX6 的鉴定 | 第49页 |
| ·菌株34-9的根癌农杆菌介导的转化 | 第49-50页 |
| ·菌株 34-9 的醋酸锂转化 | 第50页 |
| ·菌株 34-9 电转化方法 | 第50-51页 |
| ·转化子的获得和初步鉴定 | 第51-52页 |
| ·转化子遗传稳定性鉴定 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| ·生防酵母菌遗传改良的可行性 | 第53页 |
| ·原生质体融合 | 第53-55页 |
| ·融合子筛选和鉴定 | 第53-54页 |
| ·融合子筛选 | 第54页 |
| ·融合子的检测 | 第54-55页 |
| ·基因工程 | 第55页 |
| ·电击转化的效率 | 第55-57页 |
| 下一步研究计划 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-69页 |
| 在读期间发表的文章 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附图及说明 | 第71-72页 |
