| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一部分 前言 | 第12-21页 |
| 1.文献综述 | 第12-18页 |
| ·花发育的ABC模型及发展 | 第12-13页 |
| ·ABC模型 | 第12页 |
| ·ABCD模型 | 第12-13页 |
| ·ABCDE模型 | 第13页 |
| ·百合花发育MADS-box基因研究进展 | 第13-18页 |
| ·百合A类MADS-box基因 | 第14-15页 |
| ·百合B类MADS-box基因 | 第15-16页 |
| ·百合C类MADS-box基因 | 第16-17页 |
| ·百合D类MADS-box基因 | 第17-18页 |
| ·百合E类MADS-box基因 | 第18页 |
| 2.本课题研究的意义与技术路线 | 第18-21页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| ·本课题研究的技术路线 | 第19-21页 |
| 第二部分 百合AGAMOUS同源基因LLAG克隆和分析 | 第21-34页 |
| 1.材料与试剂 | 第21页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌株和载体 | 第21页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第21页 |
| 2.实验方法 | 第21-27页 |
| ·百合高质量RNA的提取 | 第21-24页 |
| ·CTAB法提取百合花芽总RNA | 第21-22页 |
| ·利用Trizol试剂盒提取RNA | 第22页 |
| ·利用改良的SDS法提取百合花芽总RNA | 第22-23页 |
| ·利用Biozol试剂盒提取总RNA | 第23-24页 |
| ·RNA电泳检测 | 第24页 |
| ·RNA反转录 | 第24页 |
| ·目的基因cDNA的扩增 | 第24页 |
| ·引物的设计与合成 | 第24页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第24页 |
| ·目的片段的回收 | 第24-26页 |
| ·离心柱回收 | 第24-25页 |
| ·硅粉回收 | 第25-26页 |
| ·目的片段与T载体的连接 | 第26页 |
| ·连接产物的转化 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第26页 |
| ·热击法转化大肠杆菌 | 第26页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第26页 |
| ·阳性克隆的序列测定及其分析 | 第26-27页 |
| 3. 结果与分析 | 第27-32页 |
| ·百合花芽总RNA的提取及检测 | 第27页 |
| ·百合AG同源基因cDNA的RT-PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第28页 |
| ·百合AG同源基因cDNA序列的获得及序列比对 | 第28-29页 |
| ·百合AG同源基因的结构域分析 | 第29-30页 |
| ·百合AG同源基因与近缘物种AG类基因的进化树分析 | 第30-32页 |
| 4. 讨论 | 第32-34页 |
| ·扩增百合花发育C类基因时花芽的选择 | 第32页 |
| ·百合LLAG基因的序列分析 | 第32-34页 |
| 第三部分 百合AG同源基因植物表达载体的构建 | 第34-45页 |
| 1. 实验材料 | 第34-36页 |
| ·菌种和质粒 | 第34页 |
| ·酶及分子生物学试剂 | 第34页 |
| ·各种实验试剂的配制 | 第34-35页 |
| ·主要实验仪器 | 第35-36页 |
| ·实验所需引物序列 | 第36页 |
| 2. 实验方法 | 第36-40页 |
| ·目的基因插入片段的获得 | 第36-37页 |
| ·目的片段的扩增 | 第36页 |
| ·目的片段的回收 | 第36-37页 |
| ·目的片段双酶切 | 第37页 |
| ·线性载体的准备 | 第37-38页 |
| ·摇菌 | 第37页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·目的基因与线性载体的连接 | 第38页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第38页 |
| ·重组质粒的筛选和鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第38页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·植物表达载体导入根癌农杆菌EHA105及其鉴定 | 第39-40页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第39页 |
| ·农杆菌感受态的电转化 | 第39页 |
| ·转化菌的鉴定 | 第39-40页 |
| 3. 实验结果 | 第40-43页 |
| ·百合AG同源基因超量表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·百合AG同源基因反义载体的构建 | 第41-42页 |
| ·百合AG同源基因干涉载体的构建 | 第42-43页 |
| ·重组质粒转化农杆菌 | 第43页 |
| 4. 讨论 | 第43-45页 |
| ·载体构建方法的比较 | 第43-44页 |
| ·干涉效果的预测 | 第44-45页 |
| 第四部分 百合AG同源基因LLAG的转化 | 第45-63页 |
| 1.实验材料 | 第45-47页 |
| ·菌种和转化植物材料 | 第45页 |
| ·化学试剂配制 | 第45页 |
| ·引物设计 | 第45页 |
| ·培养基配制 | 第45-47页 |
| ·不同载体农杆菌培养培养基 | 第45-46页 |
| ·转化烟草所用培养基 | 第46页 |
| ·转化矮牵牛所用培养基 | 第46-47页 |
| 2.实验方法 | 第47-49页 |
| ·外植体选择 | 第47页 |
| ·矮牵牛的组织培养 | 第47页 |
| ·烟草的组织培养 | 第47页 |
| ·根癌农杆菌介导法转化矮牵牛 | 第47页 |
| ·根癌农杆菌介导法转化烟草 | 第47-48页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第48-49页 |
| ·CTAB法提取植物基因组DNA | 第48页 |
| ·基因组DNA的PCR检测 | 第48-49页 |
| ·超量表达载体转基因烟草阳性植株的分析 | 第49页 |
| ·LLAG基因表达强度的RT-PCR检测 | 第49页 |
| ·LLAG基因超量表达对烟草内源基因的影响 | 第49页 |
| ·超量表达载体转基因烟草电镜扫描检测 | 第49页 |
| 3.实验结果 | 第49-60页 |
| ·转基因植株的获得 | 第49-50页 |
| ·T_0代转基因植株的PCR检测 | 第50-53页 |
| ·pMV-oxLLAG转化植株的检测 | 第50-51页 |
| ·pMV-anti-LLAG转化植株的检测 | 第51-52页 |
| ·pA-LLAGRi转化植株的检测 | 第52-53页 |
| ·超量表达载体转基因植株的分析 | 第53-59页 |
| ·不同阳性植株表达强度的RT-PCR检测 | 第53页 |
| ·表型分析 | 第53-57页 |
| ·扫描电镜检测 | 第57-58页 |
| ·烟草花发育基因NtMADS4,NtMADS11表达差异的检测 | 第58-59页 |
| ·反义载体转基因植株表型分析 | 第59页 |
| ·干涉载体转基因植株表型分析 | 第59-60页 |
| 4.讨论 | 第60-63页 |
| ·超表载体转基因植株表型变化分析 | 第60-61页 |
| ·外源C类基因影响烟草内源基因的表达 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
